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背景胰腺癌(PC)较其他实体瘤而言,是一种恶性程度极高、预后极差的恶性肿瘤。由于胰腺癌症状隐匿,早期诊断较困难,在首次就诊时,大约只有15%-20%的病人可以接受根治性手术治疗。所以,提高胰腺癌的早期诊断率对改善胰腺癌患者的远期预后显得尤为重要。循环肿瘤细胞(CTCs)是实体瘤脱落入血并参与外周血循环的肿瘤细胞。在前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌中,循环肿瘤细胞已经被誉为检测化疗疗效最有潜力的生物标记物了。循环肿瘤细胞是一种新兴的、无创的检测肿瘤的方法。然而,基于Ep CAM和CK表达的传统的Cell Search方法有较高的假阴性率仍然是限制循环肿瘤细胞发展的主要问题。方法1.样本收集。本研究纳入了2014年4月到2016年7月就诊于天津医科大学肿瘤医院的83例就诊者,其中包括40例胰腺癌患者、8例胰腺良性疾病患者和35例健康人。本研究纳入的所有胰腺癌患者均为病理确诊,且为首次诊断并未接受任何治疗的患者。2.NE-i FISH方法检测胰腺癌。首先,进行阴性富集,通过密度梯度离心法尽可能去除血样中的血源性细胞。抗-CD45抗体和抗-CK18抗体分别被用来标记白细胞和循环肿瘤细胞。将富集的循环肿瘤细胞固定至载玻片上,31℃干燥过夜。将10μL的8号染色体探针轻柔滴加至载玻片上干燥过的细胞上,然后76℃变性10分钟,37℃杂交90分钟。最后用4,6二氨基-2-苯茚二酮(DAPI)染核,然后就可以在荧光显微镜下观察计数了。结果1.通过免疫荧光和染色体原位杂交,固定的细胞被分为5种亚类,分别是:A类:CK18-,CD45-,DAPI+,CEP-8≠2;B类:CK18+,CD45-,DAPI+;C类:CK18-,CD45+,DAPI+;D类:CK18-,CD45-,DAPI+,CEP-8=2;E类:循环肿瘤癌栓(CTMs)。其中,A类、B类和E类是循环肿瘤细胞,C类属于血源性细胞,D类是不确定的细胞。2.对于循环肿瘤细胞数量的中位数和阳性率,胰腺癌患者明显比对照组(胰腺良性疾病患者及健康人)检测到的多。受试者工作曲线(ROC曲线)显示当循环肿瘤细胞数目取临界值为1.5个/7.5m L时,循环肿瘤细胞诊断胰腺癌的敏感性为77.5%、特异性为79.1%(AUC=0.861,95%CI 0.78–0.941)。3.胰腺癌CTC<3组病人的一年生存率明显长于CTC≥3组(p=0.043)。然后,我们又继续分析了染色体异倍性与生存期的关系。我们发现三倍体CTC≥3组病人的一年生存率明显差于三倍体CTC<3组(p=0.0279),其总生存率也明显差于CTC<3组(p=0.0188)。通过对比化疗前后染色体异倍性的变化,我们发现行1周期化疗后三倍体数量下降(χ2=30.381,p<0.001)。4.在40例胰腺癌病人中,只有6位病人检测出循环肿瘤癌栓,这6位病人均为晚期转移性胰腺癌患者(Ⅳ期)。CTM=0组的总生存率明显优于CTM>0组,而且,CTM=0组的中位生存期是8.27个月明显长于CTM>0组的6.6个月(p=0.0277)。结论NE-FISH检测系统明显较传统的检测方法提高了胰腺癌患者CTCs的检出率,CTCs联合CA19-9可提高胰腺癌的检出率。三倍体CTCs可以作为胰腺癌诊断和监测预后的一个生物标志物,CTMs在转移性胰腺癌患者的化疗耐药检测方面具有较大的潜力。