蜱,作为专性体表寄生虫,主要侵袭哺乳类、鸟类、爬行类以及两栖类等,其危害不仅在于摄食人和宿主动物的血液,还可通过吸血传播病毒、细菌和原虫等病原,引起人和动物的发病。目前主要通过化学防治来进行蜱的防控,但该方法会污染环境、危害食品安全等。新型防控方法,如疫苗和生物防治,都还未取得成功,因此急需研发其他新型防控蜱的技术。近年来,RNAi已经应用于蜱、蚊子等各种动物的基因功能研究中。因此,本研究在RNAi的原理基础上,选择P0作为靶基因,对双链RNA作为潜在的杀蜱剂进行探索。本研究通过3’RACE和5’RACE的方法从镰形扇头蜱中克隆了P0全长基因。将该基因的ORF克隆至p GEX-4T-1,构建P0/pGEX-4T-1重组质粒,使P0基因在原核表达系统中表达。P0重组蛋白免疫小鼠后,制备抗血清,进行Western blot分析。结果显示,P0基因全长序列为1118 bp,具有一个编码319个氨基酸的开放阅读框,推测P0的蛋白大小约为35 ku,没有信号肽序列。P0与其他蜱种具有很高的同源性,本研究获得的P0基因与微小扇头蜱、长角血蜱的该基因相似性分别为94%、87%。原核表达系统获得的重组蛋白大小为60 ku,Western blot分析显示重组蛋白制备的小鼠血清可以识别镰形扇头蜱体内的唾液腺蛋白。体外合成P0双链RNA和Luciferase双链RNA。将三种转染试剂Lipofectamine 2000、CellfectinⅡ和DMRIE-C与双链RNA混合后浸染镰形扇头蜱的各个发育阶段优化最佳转染试剂、转染试剂与双链RNA的最佳混合比例以及最佳浸染时间。将优化的最佳条件浸染各个发育阶段的蜱之后,观察生物学特性。结果显示:对成蜱、若蜱和幼蜱,最佳转染试剂均为DMRIE-C;针对成蜱和幼蜱,转染试剂与双链RNA的最佳混合比例是1:1,而若蜱,两者的最佳混合比例是1:2;成蜱、若蜱的最佳浸染时间分别为12 h、6 h,而幼蜱的最佳浸染时间则是24 h。杀蜱试验表明蜱体内的P0基因被沉默后,会影响蜱吸血的相关生物学特性,比如:降低24 h吸附率、降低平均饱血体重、延长平均饱血时间等,甚至导致蜱死亡。本研究证实了镰形扇头蜱P0基因沉默情况下对蜱生活史的完成造成严重影响,甚至阻碍其发育繁殖并导致死亡,成为一种可能的抗蜱疫苗候选分子,可为蜱和蜱传病的防治提供科学依据。