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柑橘采后因真菌性病害造成的损失严重,其中以青霉(Penicillium italicum)和绿霉(Penicillium digitatum)为主。国内外主要靠化学药剂处理进行防治。本文以具有生防潜能的绿色粘帚霉(Gliocladium virens)为对象研究其发酵条件和优化组合;对它的拮抗物质粗提取,检测这些活性物质的生理生化性质,测定它们对柑橘青绿霉菌的抑菌活性;在此基础上,与青绿霉孢子悬浮液以及化学杀菌剂的处理比较防治效果。本研究的主要结果如下:1.从柑橘园土壤中分离得到G.virens菌株共32个。通过比较它们对柑橘青霉病、绿霉病的拮抗性发现,G-3菌株对柑橘青霉病拮抗性最强;G-4菌株对柑橘绿霉病拮抗性最强。通过单因素法对生防菌G-3、G-4菌株的液体培养条件进行了优化,结果表明,优化培养基配方为3#液体培养基:菌核粉5g、氯化钠3g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁(MgSO4.7H2O)3g;回时,初始pH 6、培养温度25℃-30℃、接种量为菌丝圆片5块、全黑暗振荡、摇瓶装液量50mL/250 mL、培养时间8d时G.virens发酵液的抑制作用最强。2.对发酵液的一些理化性质进行了研究。结果表明,发酵液具有较高的热稳定性;在酸性、中性环境下比较稳定,碱性环境下不稳定;发酵液4℃下保存半个月,几乎能维持不变的抑菌作用;随时间的继续增长,抑制率下降,一个月后不再有明显变化;发酵液抑菌谱测定表明,对柑橘青霉病菌(Penicillium italicum)、绿霉病菌(Penicillium digitatum)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、终极腐霉病菌(Pythim ultimum)、葡萄根霉病菌(Rhizopus stolorifer)均有较强的抑制作用,结果表明其对土传病害具有较强的防治潜力;通过对发酵液经蛋白酶处理后的抑菌活性测定表明,其抑制率明显降低,表明蛋白酶参加了对病原菌的抑制作用;经不同极性有机溶剂的溶解性检测,活性成分易溶于乙酸乙酯、氯仿;通过显色反应表明,粗提取物呈酸性,其中可能含有酚类和酮类的特征基团。3.应用DNS试剂对代谢产物中纤维素酶及几丁质酶活力的测定。G-4菌株的纤维素酶活力优于其它菌株为80.94U/mL;G-11菌株几丁质酶活力最高为21.47U/mL。这与G-4,G-11菌株发酵液的抑菌活性强保持一致性,表明其抑菌活性与这两种酶活力有一定相关性。4.本文采用薄层色谱法(TLC)选择展开剂,乙酸乙酯:氯仿(4:6)的Rf(0.31、0.52、0.634、0.753、0.94),Rf在要求的0.2-0.8之间,有较好分离效果;用硅胶柱层析分离技术将活性成分从发酵液中提取分离出来,发现有三种主要成分具有较强的抑制活性。活性成分1对柑橘青、绿霉病的抑制率分别为48.32%、60.83%;活性成分2对柑橘青、绿霉病的抑制率分别为48.01%、57.35%;活性成分3对柑橘青、绿霉病的抑制率分别为35.28%、55.79%。5.与孢子悬浮液以及化学杀菌剂比较,测定了提取物水溶液对柑橘青霉、绿霉病的防治作用。果实处理5d后,CK的病情指数55.69%,活性物质1的对柑橘青绿霉病的病情指数分别是29.87%、22.63%,表明活性物质1有较强的防腐作用。柑橘果实室内贮藏实验结果表明,贮藏30d、60d和90d后,各活性成分对柑橘青霉、绿霉病的发生均具有不同程度的抑制作用。柑橘果实室内贮藏90d后,活性物质1对柑橘青绿霉的室内防效最好,分别为73.22%、71.66%,略低于当前常用药剂而明显高于分生孢子液的处理。