幽门螺杆菌感染小鼠呼气试验模型建立及其影响因素分析

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目的:通过建立幽门螺杆菌小鼠13C-UBT、14C-UBT模型,探究构建小鼠呼气模型的条件和方法,分析影响幽门螺杆菌小鼠呼气模型仪器、条件及生物因素,为研究幽门螺杆菌动物模型提供一种无创性实时检测方法,客观评价HP疫苗在小鼠模型中的免疫保护效果以及对H.pylori致病性的深入研究提供一种简单、快速、便宜而且可靠的诊断手段。方法:利用6~8周龄BABL/c小鼠构建小鼠呼气模型的条件方法:通过对小鼠饲喂不同13C-Urea、14C-Urea药物剂量,间隔不同时间检测,建立13C-UBT、14C-UBT实验模型;饲喂不同H.pylori菌量,通过相同时间检测,探究13C-UBT在相同检测时间中饲喂不同菌量的小鼠的呼气关系;小鼠饲喂不同H.pylori菌量,不同时间检测,探究13C-UBT、14C-UBT中不同菌量和时间的相互关系。探究影响幽门螺杆菌小鼠呼气试验模型的生物因素,确定影响呼气试验的小鼠体内菌种的组织定位,分离培养并筛选影响呼气试验的小鼠体内尿素酶阳性细菌;对分离出的尿素酶阳性细菌进行飞行质谱鉴定及16srDNA-PCR扩增测序,两种方法确定菌株菌种;对分离出的尿素酶阳性细菌进行尿素酶活性进行定性定量的检测。结果:小鼠13C-UBT、14C-UBT同一呼气时间检测数值与小鼠饲喂药量成正相关;同一饲喂药量中随着饲喂药物后检测时间延长,衡量呼气的检测数值增大,一定时间后达到最大值,此后随时间的延长,检测数值减小。成功建立幽门螺杆菌小鼠13C-UBT、14C-UBT模型:13C-UBT模型中选用0.1mg-13C-Urea药量,给予小鼠300ml活动空间,饲喂药物后呼气10min,收集250ml气体进行检测;14C-UBT呼气中选用0.556KBq-14C-Urea药量,给予200ml活动空间,饲喂药物后呼气10min,收集150ml气体进行检测;饲喂小鼠不同菌量H.pylori进行相同呼气时间的检测,13C-Urea、14C-Urea呼气试验中呼气数值均随着H.pylori菌量的升高而增大;饲喂小鼠不同H.pylori菌量,13C-UBT、14C-UBT各曲线走势相同,低浓度的菌量受到小鼠体内因素的影响大,1×109CFU的H.pylori菌量有很好的增幅曲线和趋势。成功对小鼠呼气试验中参与细菌进行定位,参与影响呼气试验的细菌位于胃及小肠组织,筛选出155株尿素酶阳性细菌;利用飞行质谱及16srDNA-PCR扩增测序两种方法确定菌株菌种,大部分为大肠杆菌,剩余以侵肺巴斯德菌居多,也检测出缓慢葡萄球菌、流感嗜血杆菌、链球菌等细菌;通过对分离出的细菌进行尿素酶活性定性定量测定,分离出的细菌尿素酶活性远远小于H.pylori。结论:(1)成功建立H.pylori小鼠13C-UBT、14C-UBT模型,能够对小鼠进行无创性实时检测;(2)小鼠13C-UBT、14C-UBT模型中13C-Urea、14C-Urea饲喂药量、 H.pylori菌量、呼气检测时间均与检测数值相关。其中H.pylori低浓度菌量受小鼠体内因素的影响大,H.pylori菌量为1×109CFU受到的影响小;(3)虽分离出的影响呼气试验的细菌尿素酶活性小于H.pylori,但在进行小鼠呼气试验中仍要注意并尽量减少其对实验的影响。
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