研究背景:胰腺导管腺癌(PDAC)是引起癌症相关性致死的最主要的疾病,数十年来,胰腺癌总的不良预后没有改观。当前,由于罕有特异性临床表现或与癌症相关的敏感性或特异性标志物而很难早期发现,因此,预防或处在可以治愈阶段的早期诊断仍然十分困难。同样,胰腺癌也仅有极少数的基因突变,对于常见的突变基因,如KRAS、CDKN2A、TP53以及SMAD4在胰腺癌中是没有药物治疗的。由于胰腺癌在基因学、表观遗传学、代谢水平以及多通路的激活和相互交叉的高度复杂性,实际上,近几年来,胰腺癌治疗手段的选择和药物治疗的进展是停滞不前的。仅有不足20%的患者有手术根治的机会,新辅助治疗并没有提高切除率,新药的联合以及多种治疗模式的采用也同样没有提高生存时间。约80%的患者术后复发最终导致死亡。显微镜下,胰腺癌细胞被厚厚的基质包绕,构成了特征性的肿瘤微环境,肿瘤微环境在肿瘤的血管生成、进展、转移、耐药性以及免疫抑制方面起到重要的作用。因此,深入了解肿瘤基质的相互作用,以便能够为胰腺癌的治疗提供新的治疗手段。Sushi重复蛋白X连锁2(Sushi repeat-containing protein,x-linked 2,SRPX2)是一种硫酸软骨素蛋白聚糖,具有细胞外基质蛋白的属性,是E2A-HLF融合基因的下游靶基因。研究发现SRPX2具有促进细胞的增殖、迁移、黏附以及促进新生血管生成功能。近几年来的一系列研究均提示,SRPX2可能在在胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的发生发展,尤其是在癌细胞的迁移、侵袭方面起到显著作用。然而,SRPX2在胰腺癌中发挥何种作用仍有待阐明。在本研究中,我们就SRPX2在胰腺癌中的侵袭、转移中的功能及信号通路进行探讨,从而初步发现SRPX2在胰腺癌发生发展中的可能作用机制。研究目的:(1)观察在胰腺癌细胞和正常细胞中,SRPX2的表达是否存在差异性。(2)观察胰腺癌组织中,SRPX2是否在转录水平上存在差异性表达以及SRPX2在蛋白水平上的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、TNM分期、慢性胰腺炎、有无吸烟史、糖尿病史、有无神经侵犯多项临床指标之间的关系并探讨SRPX2与磷酸化的着斑激酶有无关联性。(3)观察SRPX2沉默后的胰腺癌细胞株迁移、侵袭、增殖和凋亡功能的变化。材料和方法:(1)通过RT-PCR和免疫印迹法检测6种胰腺癌细胞系:AsPC1、Capan2、CFPAC1、HPAC、PANC1、SW1990和人胰腺导管上皮细胞(hTERT-HPNE)细胞株中SRPX2在mRNA水平和蛋白水平的表达。(2)应用RT-PCR检测12例胰腺癌组织和相对应的癌旁组织中SRPX2mRNA;免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)方法检测81例胰腺癌组织,44例对应癌旁正常组织中SRPX2蛋白的表达。同步免疫组化检测81例磷酸化着斑激酶(Focal adhesion kinase,FAK)的水平,应用相应统计学方法分析SRPX2表达水平与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、TNM分期、慢性胰腺炎、有无吸烟史、糖尿病史、有无神经侵犯多项临床指标之间的关系以及SRPX2与磷酸化的着斑激酶有无关联性。(3)运用RNA干扰建立SRPX2静默的稳定细胞株(PANC1、SW1990),应用western blot实验检测SRPX2蛋白的表达,Transwell和Matrigel检测细胞迁移、侵袭功能变化,CCK-8实验检测细胞的增殖和凋亡,从而观察生物学功能的改变。结果:(1)SRPX2在mRNA水平和蛋白水平,胰腺癌细胞株中(AsPC1、Capan2、CFPAC1、HPAC、PANC1、SW1990)均较胰腺导管上皮细胞(hTERT-HPNE)相比有明显的升高。(2)SRPX2在胰腺癌组织较癌旁组织相比,在mRNA水平和蛋白水平上均有明显的上调。而且,SRPX2表达与胰腺癌TNM分期有关,与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、慢性胰腺炎、有无吸烟史和糖尿病史及有无神经侵犯无关。另外,还发现SRPX2在胰腺癌中的表达与磷酸化FAK水平呈正相关。(3)SRPX2静默的稳定细胞株(PANC1、SW1990)中SRPX2蛋白表达水平明显降低,迁移及侵袭降低,增殖和凋亡无明显改变。结论:SRPX2在胰腺癌细胞及组织中高表达并与胰腺癌TNM分期有关,SRPX2促进了癌细胞的迁移和侵袭,与细胞的增值和凋亡无关。SRPX2上调FAK磷酸化水平,说明SRPX2及其FAK传导通路可能在胰腺癌的发生发展过程中扮演角色,本课题可能为胰腺癌的早期诊断以及SRPX2作为治疗的靶点提供了理论依据。