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目的通过RNAi下调人结肠癌细胞株SW480 Pokemon基因的表达水平,了解Pokemon基因对SW480生物学行为的影响,研究Pokemon基因在人结肠癌中的作用,探讨Pokemon的致癌机制。
方法 构建靶向人Pokemon基因的特异性RNAi干扰质粒psiRNA1~3,脂质体介导转染人结肠癌细胞株SW480;检测转染前后SW480 Pokemon基因、P53基因在mRNA水平的表达,细胞增殖、凋亡以及细胞周期时相的变化。
结果 psiRNA1~3干预人结肠癌细胞株SW480后,Pokemon基因表达下调,P53基因表达上调,细胞增殖变缓、凋亡增加、细胞周期阻滞于G1/S期,以干扰质粒psiRNA3作用最强。与空白对照组比较,Pokemon mRNA表达水平(Pokemon/GAPDH)由40.65[%]分别下调至29.71[%](P<0.01)、22.59[%](P<0.01)和16.41[%](P<0.01),P53 mRNA表达水平(P53/GAPDH)由52.95[%]上调至72.76[%](P<0.05)、71.30[%](P<0.05)和84.58[%](P<0.01);细胞存活率明显下降,分别降至61.42[%](P<0.05)、56.85[%](P<0.05)和54.87[%](P<0.01);凋亡率由7.03[%]分别上升至14.46[%](P<0.01)、10.25[%](P<0.05)和19.46[%](P<0.01);G1/S期细胞占全部细胞比例由70.08[%]升至:86.71[%]、90.84[%]和94.18[%](P<0.05)。
结论 Pokemon基因对人结肠癌细胞株SW480的增殖、凋亡、细胞周期有重要影响,在ARF-MDM2-P53通路中起重要调控作用。Pokemon基因可能成为大肠癌基因治疗的新的靶点,为探索结肠癌的基因治疗提供新的方向。