【摘 要】
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目的探索β-地中海贫血的无创性产前检测技术,利用孕妇血浆胎儿游离DNA和父亲外周血开发一种对胎儿进行非侵入性产前诊断的临床应用研究。进一步探讨孕妇血浆胎儿游离DNA对胎儿β-地中海贫血非侵入性产前诊断的临床应用价值。方法从海南医学院第一附属医院产前诊断中心就诊的孕妇中,收集了10例夫妇双方携带非同型的β-地贫突变基因的志愿者家系,经孕妇和她的丈夫双方知情同意后签署知情同意书。在妊娠17周至28周时
【基金项目】
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海南省重大科技计划项目:胚胎发育与再生研究及遗传资源库与诊断平台建设（编号:ZDKJ2017007）； 海南省卫生厅研究项目:孕妇外周血中运用单项PCR联合目标测序法揭示胎儿地中海贫血存在性的研究（编号:15A200063）；
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目的探索β-地中海贫血的无创性产前检测技术,利用孕妇血浆胎儿游离DNA和父亲外周血开发一种对胎儿进行非侵入性产前诊断的临床应用研究。进一步探讨孕妇血浆胎儿游离DNA对胎儿β-地中海贫血非侵入性产前诊断的临床应用价值。方法从海南医学院第一附属医院产前诊断中心就诊的孕妇中,收集了10例夫妇双方携带非同型的β-地贫突变基因的志愿者家系,经孕妇和她的丈夫双方知情同意后签署知情同意书。在妊娠17周至28周时经腹穿刺羊膜腔抽取羊水这一常规的有创性产前检测的方法,应用反向斑点杂交技术检测出羊水细胞的β-地中海贫血基因型,判断有无携带父源性β-地中海贫血突变基因,将此作为金标准;采用乙二胺四乙酸二钾采血管采集孕妇静脉血10ml,同时采集丈夫静脉血2ml,提取孕妇血浆胎儿游离DNA及夫妇双方DNA,应用锚定多重PCR联合二代测序（高通量测序）技术,经过对比计算得出孕妇血浆胎儿游离DNA中是否存在父源性β-地中海贫血突变基因,将其与上述金标准进行对比分析,比较两者的一致性,从而验证应用锚定多重PCR联合二代测序法在孕妇血浆胎儿游离DNA中无创性产前检测胎儿β-地中海贫血的准确性和稳定性。结果1、在10例夫妇非同型β-地中海贫血的高危家系的孕妇血浆胎儿游离DNA中应用锚定多重PCR联合二代测序法经对比计算得出,4个β-地中海贫血高危家系的胎儿存在父源性β-地中海贫血突变基因,其余6个β-地中海贫血高危家系的胎儿不存在父源性β-地中海贫血突变基因。2、存在父源性β-地中海贫血突变基因的4个胎儿,其羊水细胞的β-地中海贫血基因型均遗传了来自其父亲的β-地中海贫血的突变基因;而其余6个胎儿不存在父源性β-地中海贫血突变基因的胎儿,其羊水细胞β-地中海贫血基因型中均没有遗传来自其父亲的β-地中海贫血的突变基因。结论1、应用锚定多重PCR联合二代测序法这一无创性产前检测技术,经对比计算分析后得出胎儿游离DNA中是否存在父源性β-地中海贫血的突变基因,其判断与运用反向斑点杂交技术检测羊水细胞的β-地中海贫血父系遗传结果相一致;2、锚定多重PCR联合二代测序技术是一种无创性产前检测β-地中海贫血的方法,在夫妇携带非同型的β-地中海贫血突变基因的高危家系中,可用于胎儿重型β-地中海贫血的排除。
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