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目的支气管哮喘是儿童时期的常见呼吸道疾病。支气管哮喘会引起反复发作的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状,给病患带来了极大的痛苦和沉重的经济负担。IL-6是参与哮喘发生的一种炎症因子,在哮喘气道炎症中具有重要作用。近年研究证明：凝血酶是参与呼吸道炎症的介质,可以介导前炎性转录因子NF-κB的活化。本实验外源性给予凝血酶及凝血酶抑制剂,建立标准大鼠哮喘动物模型。通过①ELISA法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中凝血酶活性；②HE染色观察各组大鼠肺组织中炎症细胞浸润情况；③免疫组化法检测各组大鼠肺组织中白介素(IL-6)蛋白表达水平；④western blot法检测各组大鼠肺组织中核因子-κB(Nuclear factor kappa B, NF-κB)蛋白表达情况。探讨凝血酶对哮喘大鼠气道炎症的影响,从而为支气管哮喘气道炎症发生机制的探讨提供新的思路。方法将24只成年雌性大鼠随机分为4组,正常对照组(N组)、哮喘模型组(A组)凝血酶组(T组)、凝血酶抑制剂组(H组),每组6只。以卵蛋白(OVA)致敏并吸入激发制备大鼠哮喘模型。实验组(A组、T组、H组)大鼠分别于第1、8天每只大腿内侧皮下注射OVA悬液1ml (OVA10mg+氢氧化铝200mg+0.9%生理盐水至1ml),同时腹腔内注射灭活百日咳杆菌悬液1ml (约6×109个菌株)作为佐剂。第15天始使用402超声雾化器(上海四菱医疗器械厂)向置于密闭有机玻璃容器内的大鼠雾化吸入2%卵蛋白(现配)每次30分钟,每周3次,连续激发6周。每次雾化前30min,T组每只大鼠给予雾化吸入凝血酶72u、H组每只大鼠给予雾化吸入凝血酶抑制剂-水蛭素500u/kg。正常对照组所有干预均使用生理盐水代替OVA。造模成功后,取大鼠肺组织和BALF。采用ELISA法测定BALF中凝血酶活性, HE染色观察肺组织炎症浸润情况,免疫组化方法检测肺组织中IL-6表达,western blot法测定各组大鼠肺组织中NF-κB蛋白表达情况。结果1.一般情况观察实验组(A组、T组、H组)大鼠表现为毛发失去光泽,在造模激发过程中出现不同程度的咳嗽、打喷嚏、呼吸急促、腹肌紧张、四肢瘫软、行动迟缓、反应迟钝等症状。正常对照组则无上述症状。2.凝血酶活性哮喘组BALF中凝血酶活性高于正常对照组(P<0.05)；凝血酶组BALF中凝血酶活性高于哮喘组(P<0.05)；凝血酶抑制剂组凝血酶活性低于凝血酶组(P<0.05)。3.观察肺组织炎症浸润情况HE染色显示正常对照组气道无炎症浸润,哮喘组气道有炎症细胞的浸润,凝血酶组有大量炎症细胞浸润,较哮喘组明显,凝血酶抑制剂组炎症细胞浸润较凝血酶组减轻。4.免疫组织化学法检测肺组织中IL-6的表达正常对照组免疫组化显示肺组织IL-6基本无表达；哮喘组IL-6表达较正常对照组增多；凝血酶组IL-6表达最多,较哮喘组高；凝血酶抑制剂组IL-6表达较凝血酶组明显减少。5.肺组织中NF-κB蛋白表达情况采用western blot方法对NF-κB蛋白的表达情况进行检测,结果显示正常对照组NF-κB微弱表达,哮喘组NF-κB表达较正常对照组升高,凝血酶组NF-κB表达水平最高,凝血酶抑制剂组表达水平较凝血酶组低。结论1.大鼠支气管哮喘模型建立成功。2.哮喘大鼠气道凝血酶活性升高,凝血酶可促进哮喘大鼠气道炎性细胞浸润。3.凝血酶可促进哮喘大鼠气道NF-κB的表达,进而促进炎性因子工L-6的表达,从而参与哮喘炎症的发生。