脂肪组织特异性表达猪(鼠)Glil的转基因载体的构建

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脂肪组织在动物的能量代谢和免疫调节中起着重要的作用,当脂肪沉积过多,对人而言,将引发肥胖症、II型糖尿病和心血管疾病等多种疾病;对畜禽而言,降低瘦肉率,影响经济效益。脂肪沉积过程是一个复杂的动态平衡过程,受到多种信号通路和激素的调控。近年发现,Hedgehog (Hh)信号通路对动物脂生成具有抑制作用,并且从果蝇到脊椎动物具有高度保守性,但作用机制至今不明。Gli1作为Hh通路下游的转录因子,在Hh通路中的作用至关重要,但是Gli1在Hh通路抑制动物脂生成过程中是否发挥作用,发挥何种作用,至今未见报道。本研究通过RACE技术和RT-PCR技术获得了猪Gli1基因的cDNA全长,并完成了猪Gli1基因的组织表达谱和生物信息学分析,此外采用RT-PCR、重叠延伸PCR等方法克隆小鼠Gli1基因的编码区(CDS),并分别构建了脂肪组织特异表达猪(小鼠)Gli1基因的转基因载体,为下一步制备脂肪组织特异性表达Gli1基因的转基因猪(小鼠)并研究Gli1基因对抑制脂肪形成的分子机理奠定了基础。主要研究结论如下:(1)采用RACE技术和RT-PCR技术首次克隆猪Gli1基因的全长cDNA序列3576bp, GenBank登录号:JQ246507,分析发现Gli1基因共包含12个外显子,编码区3321bp,翻译成1106个氨基酸。对不同物种的氨基酸序列进行分析,发现猪与牛Gli1蛋白的同源性最高(94%),与小鼠同源性最低(85%),系统进化树分析也印证了上述结果;(2)组织表达谱分析表明,Gli1仅在成体猪舌组织中表达,其余心、肝、脾、肺、肾、肠、脂肪、背肌、卵巢中均未检测到表达;(3)生物信息学分析表明,猪Gli1蛋白为亲水性蛋白,不含有跨膜结构和信号肽,具有典型的五个C2H2锌指结构;(4)成功构建了脂肪组织特异性表达猪Gli1基因的转基因载体;(5)克隆了小鼠Gli1基因的CDS序列,包括3336bp共13个外显子,编码1111个氨基酸,并构建了脂肪组织特异性表达小鼠Gli1基因的转基因载体。
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