新型生物相容性纳米微球的制备及其siRNA递送效率的研究

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zdllyd2009
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RNAi(RNA干扰)可以理解为由双链RNA(dsRNA)靶向序列特异性调控基因表达而导致的基因沉默现象,是保守的基因调节机能,在细胞的发育、分裂、分化以及疾病等各种生理过程中扮演重要的转录后(post-transcriptional)基因调控角色。RNA干扰技术在医学领域中具有着巨大的应用潜力。然而,目前研究出高效、新颖的递送载体是RNAi在临床应用上所必需的。在本文中我们利用了本实验室在RNAi研究领域上的优势条件以及之前以多糖、树枝状聚合物、脂质体为基础制备纳米颗粒的技术经验,在本研究中设计并合成了新型的凝胶多糖类纳米微粒,基于胆固醇和基于脂质的纳米微粒,并采用这三种纳米微粒为传送载体来评价siRNA的体内外传送效率。  我们已合成了基于curdlan的纳米微粒(6AC-100PEG),它是通过mPEG2000与6-氨基-6-脱氧-凝胶多糖(6AC-100)相结合而成的。通过在HepG2细胞上转染siGAPDH,发现此复合物能使细胞内的内源性GAPDH基因的表达量明显降低。通过在小鼠体内转染siApoB,发现此复合物能将小鼠肝脏内的ApoB信使RNA(mRNA)表达水平降低。以上实验结果表明6AC-100PEG在体内外都能有效地递送siRNA并能诱导其RNAi效应。而且之前没有人做过关于将以curdlan为基础的纳米微粒应用于生物治疗考查其RNAi效率的研究,所以我们这个研究课题为较新颖且有其意义。  我们还设计了高效脂质siRNA递送载体-DoGo3脂质复合物,它是由天然氨基酸合成的新型多肽类。首先通过生物素标记的siRNA的转染实验发现,DoGo3脂质体复合物能将siRNA递送到小鼠的肝、脾、肺等器官,还能有效地降低其载脂蛋白B(ApoB)的表达水平,根据以上这些结果我们设计了将脂质复合物应用于裸鼠上传送肺肿瘤的新设想。以没有任何修饰的DoGo3脂质复合物(即没有肿瘤受体的)为转染载体,在裸鼠体内转染红外标记的siRNA,发现此复合物能将荧光标记的siRNA递送至肺和周围的肿瘤中。  最后,我们还测试了以胆固醇为基础的脂质复合物(Chore-1)在体内外递送siRNA的效率。实验结果也表明,该脂质复合物能在HepG2细胞上成功递送siGAPDH并能降低其信使RNA的表达量,又能有效地沉默小鼠肝脏中载脂蛋白B(ApoB)的表达并没有表现出明显的毒性。  故此,我们相信,这些研究在更多传送载体的研究及其应用中具有极大的意义。
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