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目的:马齿苋属于中华人民共和国国家卫生健康委员会规定的药食两用的植物之一,广泛分布于全国各地区。有文献指出马齿苋具有改善睡眠的潜力,本文对其可能存在的镇静催眠作用活性成分进行筛选,明确其作用,为马齿苋的产品开发提供理论依据。方法:(1)提取马齿苋中的多糖、生物碱、黄酮成分以及植物体中褪黑素,并对其进行富集纯化处理,然后利用紫外分光光度法检测提取物中马齿苋总多糖、总生物碱、总黄酮的含量,以备后续实验;利用固相萃取联合高效液相色谱法(HPLC)分析马齿苋植物体中的褪黑素含量。(2)以戊巴比妥钠协同睡眠实验筛选各有效组分提取物对小鼠的促进睡眠作用,分别给予小鼠马齿苋多糖、生物碱、黄酮三种活性组分且分别设置三个剂量组高剂量(200 mg/kg)、中剂量(100 mg/kg)、低剂量(50 mg/kg)以及马齿苋褪黑素提取物组(0.4 mg/kg,以褪黑素计),灌胃给药;腹腔注射戊巴比妥钠,观察马齿苋多糖、生物碱、黄酮成分以及植物体褪黑素对于小鼠睡眠潜伏期、睡眠持续时间的影响。(3)参考小鼠脑图谱植入皮层脑电电极,手术后恢复一周,记录脑电图。利用对氯苯丙氨酸(PCPA,300 mg/kg)腹腔注射复制小鼠失眠模型,记录小鼠体重,采集造模结束后小鼠24小时脑电确保造模成功,设置空白组、模型组、地西泮组(1.5 mg/kg)、马齿苋黄酮组(200 mg/kg),连续给药7天,末次给药后30 min记录各组小鼠24小时脑电图,分析各组小鼠白天(5:00-17:00)以及夜晚(17:00-5:00)清醒期(Wake)、睡眠期(Sleep),并对小鼠睡眠时相做分期处理分为清醒期(Wake)、非快动眼睡眠(NREM)、快速动眼睡眠(REM),然后分析各组小鼠时相转换频率;以此比较各组小鼠睡眠的差异,观察马齿苋总黄酮的镇静催眠作用。(4)脑电采集结束时,各组小鼠断头处死,于冰面迅速剥离全脑,分离下丘脑以及海马存于液氮中,精密称取脑组织置于1.5 m L离心管中,加入9倍量预冷生理盐水匀浆,低温离心,取上清液存于-20℃备用,最后根据试剂盒说明书绘制标准曲线、测定下丘脑以及海马中5-羟色胺的含量,利用实时荧光定量PCR技术检测海马中5HT1A和5HT2A m RNA的表达。结果:(1)马齿苋多糖得率为7.12%,纯度为32.00%;生物碱得率为0.083%,纯度为70.41%;黄酮得率为0.96%,纯度为35.12%;马齿苋植物中的褪黑素含量为686.43±2.75ng/g。(2)确定50 mg/kg的戊巴比妥钠剂量为小鼠入睡阈剂量,马齿苋总多糖、总生物碱、总黄酮及褪黑素提取物的戊巴比妥钠协同睡眠实验结果显示:马齿苋黄酮高剂量(200 mg/kg)和马齿苋中褪黑素提取物0.4 mg/kg对于戊巴比妥钠致睡小鼠睡眠具有延长作用,可缩短睡眠潜伏期。(3)成功植入小鼠皮层脑电电极并采集脑电图,通过PCPA进行造模,造模小鼠体重负增长,证明造模成功。对比空白小鼠及模型组小鼠脑电分析显示日间和夜间睡眠量显著减少(P<0.001);非快动眼睡眠(NREM)以及快速动眼睡眠(REM)都减少,小鼠睡眠片段化程度显著增加(P>0.001)。结束7天给药后,阳性对照地西泮组小鼠对比模型组小鼠,夜间和日间睡眠量显著增加(P<0.001),非快动眼睡眠(NREM)以及快速动眼睡眠(REM)都增加(P<0.001),时相转换频率显著减少(P<0.01);马齿苋黄酮组(200 mg/kg)对比模型组小鼠夜间和日间睡眠量显著增加(P<0.05),非快动眼睡眠(NREM)增加,时相转换频率显著减少(P<0.01)。分析还发现模型组小鼠睡眠维持时间短而且睡眠碎片化严重,地西泮组碎片化程度大幅度降低,夜间和白天长时期睡眠维持时间发生次数增加;总黄酮组小鼠在夜间和白天长时程单次NREM期睡眠发生次数增加。(4)小鼠脑内五羟色胺含量检测结果显示,对比空白组小鼠模型组脑内五羟色胺含量显著下降(P<0.01),马齿苋总黄酮组脑内五羟色胺含量升高(P<0.05),下丘脑中五羟吲哚乙酸/五羟色胺比值下降。基因表达显示马齿苋黄酮组小鼠海马中5HT1A和5HT2A m RNA与模型组无显著性差异。结论:(1)马齿苋发挥镇静催眠作用的活性部位为马齿苋黄酮类成分以及所含的褪黑素。(2)马齿苋黄酮类成分(200 mg/kg)可以改善由于PCPA导致的小鼠睡眠,主要是通过影响长时程的NREM期睡眠发生次数增加NREM睡眠量。(3)马齿苋黄酮类成分,其发挥镇静催眠机制与提升PCPA小鼠脑内五羟色胺的含量,提升五羟色胺利用率有关。