EGCG逆转宫颈癌SiHa/DDP细胞系顺铂耐药性的研究

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目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对宫颈癌SiHa/DDP耐药细胞株顺铂耐药性的逆转作用及相关机制。方法:不同浓度的顺铂处理SiHa/DDP细胞和SiHa细胞,MTT法检测两种细胞的增殖抑制率,计算两种细胞各自的IC50和SiHa/DDP细胞的耐药指数,验证SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药性;采用MTT法测定不同浓度下EGCG对SiHa/DDP细胞增殖抑制率的作用,IC5作为EGCG的非细胞毒性浓度,是后续的实验中的最佳逆转耐药浓度;为了明确EGCG对SiHa/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用,设立对照组、顺铂组以及顺铂+EGCG组,采用MTT法计算各组细胞的增殖抑制率,获得每组IC50,计算EGCG对SiHa/DDP细胞的耐药逆转倍数;免疫蛋白印迹法(Western bolt)检测对照组、顺铂组和顺铂+EGCG组中P糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(ABCG2)的表达,通过观察各组蛋白表达和灰度值的差异,探讨EGCG逆转SiHa/DDP细胞顺铂耐药性的分子机制。结果:1.用不同浓度的顺铂(0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml)处理SiHa细胞48小时,SiHa细胞增殖抑制率分别为18.37%、24.72%、52.86%、82.60%。对应浓度的顺铂作用于SiHa/DDP细胞48小时后各组细胞增殖抑制率分别为4.39%、7.65%、11.58%、25.45%。计算两细胞的IC50值分别为2.13、15.81。由此计算可得SiHa/DDP细胞的耐药指数RI=IC50(SiHa/DDP组)/IC50(SiHa组)=15.81/2.13=7.42。差异具有统计学意义(P<0.05)。2.不同浓度EGCG(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)处理SiHa/DDP细胞48小时后,MTT法检测各组的细胞增殖抑制率分别为4.60%、9.47%、23.57%、39.67%、60.22%。在浓度为5μg/ml的EGCG处理细胞后,细胞增殖抑制率小于5%,作为最佳逆转耐药浓度参与随后的实验。3.不同浓度顺铂与5μg/ml EGCG联合作用于SiHa/DDP细胞48小时后,各浓度梯度下细胞增殖抑制率分别为11.54%、23.41%、39.29%、78.02%,其IC50为2.68。单用顺铂48小时后,其增殖抑制率分别为4.39%、7.65%、11.58%、25.45%。通过计算可得IC50为15.81,耐药逆转倍数RI=IC50(顺铂组)/IC50(顺铂+EGCG组)=15.81/2.68=6.06。差异具有统计学意义(P<0.05)。4.顺铂单独作用于SiHa/DDP细胞后,P-gp蛋白的表达高于对照组,差异具有统计意义(P<0.05)。将顺铂与EGCG联合应用于SiHa/DDP细胞后,与对照组和顺铂组相比,P-gp蛋白和ABCG2蛋白表达显著下调,均具有统计学差异(P<0.05)。结论:EGCG可逆转SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药,其机制可能与抑制细胞中P-gp蛋白、ABCG2蛋白的表达有关。
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