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目的:观察扶正消癥方通过调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)免疫检查点PI3Ky,重塑TAM表型,影响胃癌生长转移的分子机制。方法:1.建立TAM模型。显微镜下观察细胞形态,流式细胞技术检测细胞标志性抗原(M1:CD86;M2:CD206),实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测TAM相关基因、蛋白水平(M1:TNF-α;M2:IL-10)对TAM模型中M1/M2细胞的占比进行鉴定。蛋白质印迹法检测M0及TAM中PI3Kγ相关蛋白表达水平,对比差异。2.观察过表达/低表达PI3Kγ对TAM表型的改变,及对胃癌增殖转移的影响。蛋白质印迹法检测PI3Kγ蛋白表达水平,流式细胞技术检测细胞标志性抗原(M1:CD86;M2:CD206),实时荧光定量PCR检测相关基因(M1:TNF-α;M2:IL-10)水平。将不同PI3Kγ含量的TAM细胞与胃癌细胞共培养,侵袭、划痕实验观察胃癌侵袭、迁移能力,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测观察凋亡、上皮间质转化(EMT)相关基因及蛋白表达。3.观察扶正消癥方作用后的TAM细胞对人胃癌细胞HGC-27增殖、侵袭、迁移的改变并研究其机制。蛋白质印迹法检测TAM上PI3Kγ通路相关分子的蛋白表达水平(PI3K,p-PI3K,C/EBPβ,p-C/EBPβ,NFK B,p-NFκ B),流式细胞技术、实时荧光定量 PCR和蛋白质印迹检测TAM表型。并观察TAM细胞侵袭、划痕实验观察胃癌侵袭、迁移能力,MTT细胞活力实验观察增殖,实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测观察细胞凋亡、上皮间质转化相关基因及蛋白表达。4.体内实验观察扶正消癥方对胃癌的作用及机制研究。造胃小鼠癌腋下瘤模型,观察扶正消癥方作用后各组小鼠瘤体、体重的变化。免疫荧光、流式细胞技术检测组织标本中TAM的表型,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测观察细胞凋亡、上皮间质转化相关基因及蛋白表达,并再次验证其与瘤体PI3KY表达变化的相关性。结果:1.TAM细胞的形态符合椭圆形且伸出较长伪足而呈不规则形的特点,且高表达CD206基因,IL-10细胞因子,低表达CD86基因,TNF-α细胞因子;2.高表达/低表达TAM中的PI3Ky可上调/下调TAM的CD206基因,IL-10细胞因子下调,下调/上调CD86基因,TNF-α细胞因子;与MO型未分化巨噬细胞相比,用高表达/低表达PI3Kγ的TAM干预人胃癌细胞HGC-27,可增加/减少其增殖、迁移、侵袭,能下调/上调Bax,E-cadherin,上调/下调Bcl-2,N-cadherin的mRNA表达,下调/上调Bax,E-cadherin,上调/下调Bcl-2,N-cadherin的蛋白表达;3.扶正消癥方能降低TAM中的PI3Ky含量,下调TAM的CD206基因,IL-10细胞因子下调,上调CD86基因,TNF-α细胞因子;与MO型未分化巨噬细胞相比,扶正消癥方作用后的TAM细胞,可减少人胃癌细胞HGC-27的增殖、迁移、侵袭,能上调Bax,E-cadherin,下调 Bcl-2,N-cadherin 的 mRNA 表达,上调 Bax,E-cadherin,下调 Bcl-2,N-cadherin 的蛋白表达;4.在615小鼠腋下移植瘤实验中:与对照组相比,扶正消癥方能增加小鼠体重、减少瘤重及延长小鼠存活时间;能减少肿瘤组织的CD206,增加肿瘤组织的CD86,大剂量扶正消癥方组趋势更明显;各实验组对凋亡、EMT相关基因/蛋白均有调控作用,且这些变化与小鼠瘤体中TAM的PI3K γ含量呈负相关。结论:1.肿瘤相关巨噬细胞的形态、功能及表型均偏向M2型巨噬细胞;2.巨噬细胞的PI3Kγ是调节胃癌微环境中TAM极化方向的重要免疫检查点;3.扶正消癥方通过抑制PI3Kγ表达促使TAM重极化为抗肿瘤M1表型,进而促进胃癌细胞凋亡,抑制胃癌细胞EMT,最终抑遏胃癌的生长和转移;