PM10对Balb/c小鼠泪膜功能及眼表组织结构影响的实验研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tianfong
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目的:通过大气颗粒物PM10(particular matter,PM)混悬液点眼建立小鼠眼表损伤模型,研究大气颗粒物PM10对小鼠泪膜功能和眼表组织结构的影响。方法:选取60只68周龄的雄性Balb/c小鼠,标准环境下饲养,根据随机数字表将小鼠随机分为A组、B组,每组30只。A组小鼠每次右眼采用5ul无菌磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)点眼,每天4次持续14天。B组小组每次右眼采用5ul 5mg/mL PM10混悬液点眼,每天4次持续14天。分别在干预前和干预第0,4,7,10,14天对两组小鼠进行泪膜功能检测,包括泪液分泌量(tear volume)、泪膜破裂时间(break-up time,BUT)、荧光素染色(corneal fluorescein staining,FL)、虎红染色(rose bengal staining)、丽丝胺绿染色(Lissamine Green staining)及炎症评分(inflammatory index)。两组小鼠分别在干预第14天收集小鼠眼球组织行光学显微镜检查、苏木精-伊红染色(Hematoxyin-eosinstaining,HE染色)、过碘酸-希夫染色(Periodic acid-schiff,PAS染色)检查、扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)、透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)、角膜K10蛋白免疫荧光染色(immunnostaining of cytokeration 10,K10)检查及免疫印迹法检测角膜TNF-α、NF-ΚB p65及p-NF-ΚB p65评估PM10对小鼠眼表组织结构的影响。结果:使用PBS滴眼液(A组)及PM10混悬液(B组)干预0d、4d、7d、14d后,A组小鼠泪液分泌量、泪膜破裂时间、荧光素染色较干预前无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05),而B组小鼠泪液分泌量、泪膜破裂时间、荧光素染色在每个时间点都有显著差异,且差异有统计学意义(P<0.05);点眼14天后,A组小鼠角膜荧光素染色、虎红染色及丽丝胺绿染色呈阴性,B组小鼠角膜荧光素染色、虎红染色及丽丝胺绿染色呈点片状着染,与A组相比,B组小鼠泪液分泌量减少、泪膜破裂时间缩短,荧光素染色、虎红染色及丽丝胺绿染色评分显著高于A组(P<0.05)。HE染色结果显示A组小鼠角膜上皮细胞层数显著低于B组(P<0.05)。PAS染色结果显示B组小鼠穹窿结膜杯状细胞数量较A组明显降低。凋亡实验显示B组小鼠角膜上皮细胞和基底上皮细胞凋亡。免疫荧光检测到B组K10高表达表明PM10可导致眼表上皮异常分化和增殖。扫描电子显微镜和透射电子显微镜显示B组小鼠角膜上皮微绒毛及角膜上皮细胞间桥粒数目较A组均减少。WB实验结果表明B组小鼠角膜TNF-α、NF-κB p65和p-NF-κB p65表达较A组小鼠显著增加。结论:PM10可损伤小鼠泪膜功能,造成小鼠眼表组织结构的破坏。局部使用PM10混悬液点眼导致小鼠眼表的改变与人类干眼的临床表现相吻合。
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