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杜仲叶为杜仲科杜仲属植物杜仲(Eucommia Ulmoides Oliv.)的叶子。近年来研究表明,杜仲叶与杜仲皮的有效成分基本相同,甚至某些有效成分(如绿原酸)的含量远远高于皮。绿原酸具有显著的清热解毒、抗菌消炎、保肝利胆及提高机体免疫力等作用,具有良好的发展前景。本文对杜仲叶中绿原酸的提取、分离纯化工艺进行了研究,以期为合理开发利用杜仲叶资源利用提供可靠的理论依据和技术支持。 1.绿原酸检测方法的确定(1)紫外分光光度法 以绿原酸标准品为参考,进行全波长扫描,确定绿原酸的最大吸收峰;制定标准曲线,回归方程为:A=0.05221C+0.01785 R=0.9989,在2~18μg/mL范围内检测溶液的浓度与吸光度有良好的线性关系。 (2)高效液相色谱法 采用的高效液相色谱法测定绿原酸,流动相 A(0.4%磷酸水溶液):流动相B(乙腈)为13:87。检测波长为207nm和325nm。流速为1.0 mL?min,进样量为10μL,柱温30℃。 2.杜仲叶中绿原酸的提取研究 优化了杜仲叶中绿原酸的提取技术参数,得到其最佳提取条件,浸提温度为60℃,乙醇浓度为60%,时间为2.5 h,物料比1:12, pH为4,提取次数2次。绿原酸的提取率为2.434%。 3.绿原酸的分离纯化 主要是采用大孔树脂法,从五种树脂中筛选出 S-8及NKA-9型大孔吸附树脂用于绿原酸分离。并对影响树脂吸附分离的各种因素(如进样液 pH值、进样液浓度、进样液流速、洗脱条件)进行了考察,从解吸的效果来看,NKA-9型树脂比较适合用于绿原酸的分离。得到最佳吸附参数如下:吸附液绿原酸的浓度为0.458 mg/mL、吸附液 pH值为5、流速为3BV/h;解吸参数如下:解吸剂为50%乙醇、解吸剂流速为3BV/h、pH值为6。 4.分离角质层 植物的细胞壁是由纤维素组成的,细胞之间又是由果胶粘接的,在细胞内还含有大量的淀粉,所以,本实验是从未粉碎的杜仲叶入手,用酶液对叶片进行水解,先去除叶表面的角质层,从而可改变细胞壁的通透性,有利于壁内的药效成份溶出,进而提高药效成份的提取率。使用复合酶可以同时水解植物结构中的多种成分,加速植物组织结构的破坏。本次试验主要考察的是纤维素、果胶酶单酶液和二者复合酶液作用的时间顺序及pH值对角质层脱落程度的影响。得出了最佳的脱落角质层的方法即先用pH5.5的果胶酶液处理5~6天后,换用pH5.5的复合酶液作用直至角质层能完全剥落。