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目的:研究护卵汤对GnRHa超排卵大鼠卵泡发育及卵子质量的影响,从细胞和分子水平探讨相关的作用机制,为护卵汤参与西医辅助生殖技术提供有效的依据。方法:模仿人类辅助生殖中的长周期,对大鼠进行GnRHa垂体降调节预处理后再用HMG等药物超排卵(模型组),同时随机给予不同剂量的中药护卵汤辅助治疗(中药低、中、高剂量组),以及自然周期未使用任何药物的大鼠为正常对照(正常组)。在HCG日通过光镜及电镜等方法观察各组大鼠的卵巢形态结构;TUNEL法检测卵巢细胞凋亡现象;放射免疫法检测血清FSH、LH、E2、P含量;抗体芯片法检测卵巢微环境细胞因子及受体的表达;免疫组织化学法观察卵巢细胞FSHR、LHR蛋白的表达。在孕12天观察各组大鼠的妊娠胚胎数。结果:(1)与正常组相比:模型组卵巢指数增加,差异有统计学意义(P<0.05);模型组优质卵泡率下降,差异有显著统计学意义(P<0.01);模型组卵母细胞超微结构异常;模型组卵巢体细胞凋亡增多,差异有显著统计学意义(P<0.01);模型组卵巢微环境细胞因子及受体ACTH、BDNF、basic-FGF、CSK、GM-CSF、GH、GHR、IL-1β、 IL-12/IL-23p40、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、NGF-β、EG-VEGF/PK1、 PDGF-AA表达减少(下调1.5倍以上),Leptin (OB)、IFN-γ、Fas/TNFRSF6、TRAIL表达增多(上调1.5倍以上);与正常组相比,模型组卵巢FSHR蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与模型组相比,中药各剂量组的卵巢指数均增高,中剂量组的增高有显著统计学意义(P<0.01),低、高剂量组的增高无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,中药各剂量组的卵巢细胞凋亡均减少,中剂量组的减少有统计学意义(P<0.05),低、高剂量组的减少有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,中药各剂量组的优质卵泡率均增高,中、高剂量组的增高有统计学意义(P<0.05),低剂量组的增高无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,中药各剂量组血清E2含量均增加,中剂量组的增加有显著统计学意义(P<0.01),高剂量组的增加有统计学意义(P<0.05),低剂量组的增加无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,中药高剂量组卵巢FSHR表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,中药中、高剂量组卵巢LHR表达增加,中剂量组的增加有显著统计学意义(P<0.01),高剂量组的增加有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,中药中剂量组卵巢微环境细胞因子及受体ACTH、BDNF、basic-FGF、CSK、EG-VEGF/PK1、GFR-α1、GM-CSF、GHR、IL-1β、IL-12/IL-23p40、 NGF-β、PDGF-AA、TGF-β1、TGF-β3、TIMP-3表达增多(上调1.5倍以上),Fas/TNFRSF6、IFN-γ、Leptin (OB)、TNF-α表达减少(下调1.5倍以上)。与模型组相比,中药中剂量组妊娠总活胎数增多(超过1.5倍)。结论:(1)与自然周期相比,GnRHa超排卵大鼠排卵前的卵巢体细胞凋亡增多、优质卵泡率及卵子质量下降、卵巢微环境发生不良改变,提示GnRHa超排卵对卵泡发育成熟产生某些不利影响。(2)护卵汤参与GnRHa超排卵,可增加大鼠卵巢微环境GM-CSF、 IL-1β、TGF-β1等多种细胞因子及受体的含量,减少卵巢微环境IFN-γ、 TNF-α等细胞凋亡因子的含量,提示护卵汤参与超排卵能改善大鼠的卵巢微环境。(3)护卵汤参与GnRHa超排卵,能明显减少大鼠卵巢体细胞凋亡。这可能与护卵汤减少卵巢微环境Fas/TNFRSF6、IFN-γ、TNF-α等细胞凋亡因子的含量有关。(4)护卵汤参与GnRHa超排卵,能增加大鼠血清E2含量,提示护卵汤能影响超排卵大鼠的生殖内分泌环境。这可能与护卵汤改善超排卵大鼠卵巢局部细胞及分子环境相关。(5)护卵汤参与GnRHa超排卵,能增加大鼠卵巢FSHR和LHR蛋白表达,提示护卵汤可提高超排卵大鼠的卵巢反应性。这可能与护卵汤改善体内生殖内分泌环境及卵巢局部环境有关。(6)护卵汤通过以上作用机制相互关联、共同促进GnRHa超排卵大鼠的卵泡发育,增加卵巢重量,提高卵子质量,从而获得更多的优质排卵前卵泡及妊娠活胎数。提示护卵汤参与GnRHa超排卵可能提高ART的成功率