含脂辐照食品检测鉴定的免疫分析技术研究

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食品经过辐照可以控制微生物和延长货架期,但是为了落实辐照食品标签法规,提高消费者的信心,需要辐照食品的检测方法。食品中绝大多数含有脂肪,因此,利用含脂食品的特异性辐解产物2-烷基环丁酮(2-ACBs)作为标志物检测含脂辐照食品具有普适性和可靠性。2-十二烷基环丁酮(2-DCB)是2-ACBs中的1种,由食品中的棕榈酸和棕榈酸甘油酯辐解生成,由于在大部分食品中,棕榈酸是含量较高的饱和脂肪酸,并且其烃基链较短且饱和,因此2-DCB相对其它2-ACBs较为稳定,用2-DCB作为标志物检测含脂辐照食品更为实用。本文以冷却牛肉为研究对象,建立了含脂辐照食品中2-DCB的快速提取净化方法,通过制备2-DCB多克隆抗体,建立了含脂辐照食品中2-DCB快速检测的间接酶联免疫法(ELISA),构建了含脂辐照食品中2-DCB快速、超灵敏检测的F0F1-ATPase转子ε亚基调节的免疫旋转生物传感器,为实现含脂辐照食品的快速、低成本、高通量检测提供了技术支撑。论文的主要内容和研究成果如下:1.应用直接溶剂萃取(DSE)/气相色谱-质谱(GC-MS)技术建立了辐照牛肉中2-DCB的快速提取方法。用乙腈作为提取剂从辐照过的牛肉样品(30%脂肪)中直接萃取2-DCB,经硅胶固相萃取小柱净化后即得到比较纯净的2-DCB,整个过程仅需1-1.5h,加标回收率为88.7%-90.4%,RSD小于5%,表明直接溶剂萃取能充分有效地将2-DCB从样品中提取出来,满足样品中2-DCB的定性和定量分析要求。2.制备了效价较高的2-DCB多克隆抗体。将2-氧-环丁烷十一酸(2-CB-C10-COOH)作为2-DCB的半抗原与载体蛋白偶联,制得免疫原2-CB-C10-COOH-BSA和包被抗原2-CB-C10-COOH-OVA,偶联率分别为9.9:1和1.4:1,免疫新西兰大白兔后获得多克隆抗体效价高达1:102400,IC50值为0.25μg/mL,表明抗体亲和力较高,抗体与2-TCB的交叉反应率<8%,与其他各类似物的交叉反应率均<0.1%,表明抗体的特异性高。3.建立了含脂辐照食品中2-DCB检测的间接酶联免疫法(ELISA)。该方法的最低检测限为0.004μg/mL,回收率高达84.4-109.8%,批内变异系数<10.0%,批间变异系数<12.0%,表明该方法的高准确度和高精密度;用GC-MS法对该方法确证,两种方法对2-DCB的添加回收测定结果具有很好的相关性,表明该方法具有可靠性;用该方法检测经0.5、1.0、3.0、5.0和7.0kGy辐照的牛肉,辐照剂量与辐照牛肉中2-DCB浓度呈显著地线性正相关关系。该方法因其灵敏度高、快速、成本低、高通量,可用于含脂辐照食品的快速筛查。4.构建了含脂辐照食品中2-DCB检测的基于F0F1-ATPase的免疫旋转生物传感器,并优化了传感器各亚基的连接条件。该传感器最低检测限为10-8μg/mL,回收率高达75.1-109.2%,批内变异系数、批间变异系数均小于<13.0%,表明传感器具有高灵敏度、高准确度和高精密度,且整个分析过程仅需10min。经GC-MS法对传感器确证,两种方法对2-DCB的添加回收测定结果具有很好的相关性,表明该传感器检测具有可靠性。用该传感器检测经0.5、1.0、3.0、5.0和7.0kGy辐照的牛肉,辐照剂量与辐照牛肉中2-DCB浓度呈显著地线性正相关关系。该方法因其快速、超灵敏、低成本、高通量,可用于含脂辐照食品的快速筛查及其它小分子化合物的检测。
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