背景：大肠杆菌来源RNase P为一催化tRNA前体5′端成熟的核糖蛋白复合体，催化核心M1 RNA由377个核苷酸组成，可在一定盐离子环境下体外单独对RNA底物进行特异切割。RNase P为结构识别酶，其底物至少包括两个要件：1 游离NCCA-3′末端；2 特异互补的双链RNA区域。与底物特异互补的RNA片段称为GS，将GS与M1 RNA共价连接为M1GS，是具备自我引导和序列特异切割能力的核酶。 目的：筛选出靶定人巨细胞病毒（HCMV）磷酸转移酶基因的高特异性、高活性的M1GS核酶，为进一步研究以RNase P为基础的反义RNA技术抑制病毒基因表达奠定理论基础。 方法：从HCMV磷酸转移酶基因UL97序列中搜索出8个适合GS互补的靶位，克隆构建得8个M1GS核酶；将UL97基因中靶位集中的后1／4部分克隆至pGEM3z质粒。对M1GS DNA模板和两个底物模板分别进行体外转录，获得核酶M1GS及带有³²P放射性标记的两个底物片段的RNA。将M1GS与相对应的底物片段RNA在体外切割缓冲液中混合反应后电泳分离，自显影检测。 结果：从自显影结果中筛选到3个具备特异切割活性的M1GS核酶；从实验进一步证明了CCA末端及88nt bridge连接序列对M1GS切割活性的作用。 结论：我们的研究成功的将RNase P催化亚单位M1 RNA与引导序列GS连接构建为序列识别的核酶M1GS，为核酶在抗病毒方面的研究奠定了一定的理论基础。