杨树花(Flos populi)为杨柳科(Salicaceae)植物毛白杨(Populus tomentosa)、加拿大杨(Populus canadensis)、或同属树种植物的干燥雄花序,性味苦寒,具有清热解毒,化湿止痢之功效,为《中国兽药典》各版所收载。现代药理研究表明,杨树花对动物腹泻具有很好的疗效,并且杨树花所含的总黄酮为其发挥作用的主要物质基础。但目前尚无关于杨树花总黄酮富集工艺及质量控制的研究报道,大大限制了杨树花开发和利用,因此,本研究对杨树花总黄酮的提取、富集工艺进行了优化,并建立了指纹图谱质量评价方法,为杨树花总黄酮的工业化生产及质量评价提供了必要的参考。本试验首先利用Box-Behnken设计优化杨树花中总黄酮的提取工艺。考察了提取时间、温度、乙醇浓度和液料比四个自变量对黄酮提取率的影响,用响应面法评价总黄酮最优提取条件。数学回归模型的相关分析表明可以用二次多项式模型来描述总黄酮的提取过程,响应曲面图显示自变量显著影响总黄酮的提取率。获得总黄酮最大提取率的最佳参数是：温度94.66℃,乙醇浓度45.92%,液料比18.55：1(ml/g),提取时间2.27小时。在最优条件下总黄酮的平均提取率能达到53.08±0.43mg/g,符合52.04mg/g的预测值。在提取工艺优化的基础上,本试验采用大孔树脂法对杨树花总黄酮的富集工艺进行了优化。选取了NKA-9,S-8,X-5,AB-8和D101五种树脂考察吸附特性。静态吸附试验表明NKA-9树脂表现出了良好的吸附、解吸能力和快速的吸附能力,并且符合Langmuir等温曲线和Freundlich等温曲线。用动态吸附、解吸试验优化富集工艺,优化的吸附参数为：总黄酮溶液初始浓度7.64mg/mL,pH值5.0,上样量2.3BV,流速2BV/h,温度25℃；优化的解吸参数为：蒸馏水、20%乙醇各5BV,60%乙醇10BV,流速2BV/h。按照优化的条件用NKA-9树脂处理过的杨树花总黄酮在干燥提取物中含量由11.38%上升到了53.41%,回收率为82.24%。试验结果表明NKA-9树脂对杨树花总黄酮具有很好的富集能力,建立的方法稳定、可靠,为规模化生产提供了基础。为控制杨树花的质量,本研究建立了HPLC指纹图谱评价方法,分别考察了迪马DiamosilC18色谱柱(4.6mm x250mm,5μm)、日本岛津WondasilC18色谱柱(4.6mm x150mm,5μm)、华谱新创科技有限公司Unitary C18色谱柱(4.6mm x250mm,5μm)3种色谱柱,甲醇-水、甲醇-1%冰醋酸、乙腈-1%冰醋酸、乙睛-0.1%甲酸,4种流动相洗脱系统,以及不同的波长,优化了梯度洗脱程序,得到了峰位、峰形、分离度较理想的色谱图,最终建立了杨树花提取物指纹图谱的试验方法,经方法学考察试验精密度、重复性、稳定性良好,建立的方法稳定、可行。本研究首次采用响应面法优化了杨树花总黄酮的提取工艺,并首次采用大孔吸附树脂法优化了总黄酮的富集工艺,建立了指纹图谱质量评价方法,为杨树花质量标准的建立奠定了基础。本研究具有理论意义和实用价值,同时对大孔树脂富集技术、指纹图谱技术在中兽药中的应用起到了示范作用。