表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)是山羊乳腺发育过程中重要的因子,作为一种重要的生长因子参与乳腺细胞的增殖和发育。本研究选择泌乳盛期的奶山羊原代乳腺上皮细胞作为试验材料,检测了山羊乳腺上皮细胞中EGF介导的信号通路蛋白磷酸化水平,利用同步化方式获得山羊乳腺上皮细胞有丝分裂不同时相的细胞,并研究了EGF对G2/M期山羊乳腺上皮细胞脂质代谢的影响,得到的研究结果如下:本研究检测了山羊乳腺上皮细胞中EGF介导的信号通路蛋白磷酸化水平,发现乳腺上皮细胞的EGFR的磷酸化被激活,其下游的PI3K/AKT和MEK/ERK通路也被激活,特异性的抑制剂能下调以上信号蛋白的磷酸化。通过同步化方案获得不同时相的乳腺上皮细胞后检测甘油三酯和胆固醇的差异。结果表明在G2/M期乳腺上皮细胞中甘油三酯和胆固醇含量显著性的升高(P<0.01)。同时也发现EGF提高了G2/M期乳腺上皮细胞中甘油三酯的含量。使用特异性的AKT和ERK通路抑制剂结果表明,AKT和ERK通路被抑制,可以显著地降低甘油三酯的含量。为了进一步验证EGF对G2/M期乳腺上皮细胞乳脂代谢相关基因的影响。本研究检测了甘油三酯合成相关基因ATPAT6和DGAT基因、脂滴合成相关基因XDH和TIP47基因,甘油三酯转运相关基因FABP3和FABP4基因,以及脂肪酸合成相关基因PPARG、SREBP1、FASN和SCD1基因。同时检测了甘油三脂分解相关基因ACOX1、TAGL、CPT1A基因。结果表明EGF上调了DGAT、TIP47、ACOX1、TAGL和CPT1A基因的表达,降低了SREBP1、FASN、SCD1、XDH和FABP3基因的表达。综上所述,本研究发现EGF可激活山羊乳腺上皮细胞中EGFR介导的信号通路,下游的PI3K/AKT和MEK/ERK通路均被相应被激活;信号蛋白抑制剂可阻滞EGF介导的信号蛋白活性。细胞同步化试剂可使山羊乳腺上皮细胞明显地停滞在细胞各期,EGF能上调G2/M期山羊乳腺上皮细胞中甘油三酯和脂滴的含量,其主要是通过上调DGAT基因和TIP47基因的表达来实现的。