大鼠睾丸cDNA文库的免疫学筛选及大鼠新基因的特征分析

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利用异种同源基因诱导肿瘤细胞的自体免疫反应可以产生抗肿瘤作用,寻找新的有价值和有效的肿瘤异种同源免疫治疗靶分子有重要意义。本研究通过筛选大鼠睾丸文库以获得有潜在治疗价值的异种同源cDNA序列。在筛选新的靶分子时获得了一条大鼠的新基因序列R2,为尽快获得新基因的功能提示,需获取新基因的全长序列,研究其组织表达谱,并进行初步的生物信息学分析。 方法:本研究在重组cDNA表达文库的血清学分析(SerologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibrary,SEREX)技术基础上,采用人乳腺癌和卵巢癌细胞株分别免疫兔的血清筛选大鼠睾丸cDNA表达文库。筛选到的阳性克隆进行了内部剪切、核苷酸测序、插入片段的生物信息学分析和基因功能预测。我们采用RACE技术结合低严格度RT-PCR技术获得了新基因的全长cDNA序列,用RT-PCR技术检测了该新基因的大鼠组织表达谱,并结合多种生物信息学手段对其性质和功能进行分析和预测。 结果:获得的14个阳性克隆中发现了与人的基因序列有相似性的大鼠基因序列,其中一些基因序列编码的氨基酸或蛋白与肿瘤的发生发展关系密切,有可能成为肿瘤异种同源治疗的候选基因。得到了大鼠新基因两个可变剪接本RTAP2a和RTAP2b的全长cDNA序列,两个可变剪接本在大鼠组织的表达谱存在差异,生物信息学预测可能执行不同的功能。 结论:本研究经免疫学方法筛选了肿瘤异种同源免疫治疗的候选分子,并获得了大鼠新基因两个可变剪接本的全长cDNA序列,初步检测和分析了新基因的性质和功能,为进一步深入研究新基因在生命活动和肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。
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