高脂血症是指由低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）或总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平升高引起的一种疾病。近期临床研究表明高脂血症是心脑血管疾病、动脉粥样硬化以及冠心病的主要危险因素。虽然临床上存在许多降血脂药物,但由于个体差异,也有很多患者由高脂血症引发的疾病并没有得到非常好的治疗与控制。而新药的研究耗时长,毒副作用不确定,因此老药新用成为一种新的降脂药物的研发策略。人体内胆固醇的来源主要有两种方式,外源性摄入以及内源性生物合成。其中内源性合成为胆固醇合成的主要方式,而抑制胆固醇内源性合成也成为研发降血脂药物的有效手段。24-脱氢胆固醇还原酶（DHCR24）是胆固醇合成途径中最后一步反应的催化酶,它将链甾醇还原为胆固醇。本实验室在前期实验中,用分子对接的方法进行了以DHCR24为靶点、以现有药物数据库为小分子化合物来源的DHCR24抑制剂的计算机虚拟筛选,并且利用细胞水平降胆固醇效果为评价指标,初步确定了四种新型降血脂候选药物DHCR24抑制剂（分别为厄贝沙坦、利培酮、托伐普坦、考尼伐坦）的抑制效果。在此基础上,本研究中我们进一步利用高血脂动物模型的动物实验,研究了这四种候选药物的降血脂的效果及发挥作用的初步分子机制,并且利用测定DHCR24酶活性检测的体外实验,验证了厄贝沙坦抑制DHCR24酶活性的效果。首先,为了验证四种新型DHCR24抑制剂在动物水平对高血脂的影响,我们使用C57BL/6小鼠,通过高脂饲料喂养成功建立了高血脂模型。用四种新型降血脂候选药物分别灌胃处理小鼠,之后进行肝脏组织的HE染色分析以及血脂四项生化分析,来确定药物的降血脂效果。HE染色结果表明,与高血脂模型组相比,在四种新型候选药物处理的实验组中,小鼠肝脏组织均表现为细胞变小,空泡化水平显著降低。同时血液生化指标检测的结果表明药物组中厄贝沙坦对小鼠血清中胆固醇、甘油三脂以及低密度脂蛋白固醇水平均呈现出显著性下降,并伴随着高密度脂蛋白固醇的升高,而其他药物也对四种血脂指标呈现程度不同的改善效果。这一结果证明,四种降血脂候选药物在动物水平均能显著改善高血脂的症状。为了研究这类DHCR24抑制剂降血脂的分子机制,我们将对照组和实验组的小鼠肝脏组织进行了Western Blot实验。结果显示,与对照组相比,厄贝沙坦组表现出LDL-R（低密度脂蛋白受体）水平的显著升高。这一结果暗示,厄贝沙坦降低血脂的效果可能是通过阻断内源性胆固醇合成从而反馈性上调LDL-R水平来实现的。最后,我们利用DHCR24免疫复合物酶活检测的体外实验体系,研究了以上药物中表现最突出的厄贝沙坦对DHCR24酶催化胆固醇合成的抑制作用。我们首先将实验室前期构建的驱动DHCR24过表达的重组腺病毒Ad-cmv-DHCR24感染人肝脏HepG2细胞,再经过免疫沉淀实验获取到大量的抗体-DHCR24酶复合物,然后将该复合物加入到以链甾醇为底物的DHCR24酶催化反应体系中,以高效液相色谱法检测反应后底物链甾醇和生成物胆固醇的含量。实验结果显示,与IgG对照组比较,加入DHCR24免疫复合物的实验体系中链甾醇含量下降,胆固醇含量显著增加;而阳性对照药DHCR24抑制剂U18666A的添加,显著抑制了DHCR24的酶催化活性。这些实验结果证明利用该DHCR24免疫复合物检测DHCR24酶活性的检测体系构建成功。然后我们将不同浓度梯度的厄贝沙坦加入DHCR24免疫复合物酶活检测体系中,结果显示厄贝沙坦显著降低了反应体系中反应生成物胆固醇的含量,并且增加了底物链甾醇的含量,这种效果呈现剂量依赖性的特点。最后我们确定了厄贝沙坦抑制DHCR24酶活性的IC₅₀为598.64nM。综上所述,本研究通过对新型DHCR24抑制剂降胆固醇效果的初步药效学研究,证明了四种新型降血脂候选药物DHCR24抑制剂可以实现降低血脂的效果,并且对其中表现最好的候选药物厄贝沙坦降血脂的分子机制和其抑制DHCR24酶活性的酶反应动力学进行了初步研究。我们以DHCR24为靶点进行DHCR24抑制剂筛选的研究,为研发降血脂药物提供了新的研发策略,为进一步开发新的降血脂药物奠定了坚实的基础。