第一部分草苁蓉环烯醚萜苷对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用目的：观察草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)对四氯化碳(CCl4)所致肝损伤的保护作用。方法：1. IGBR的制备：将10 kg草苁蓉全草切碎后用90%乙醇提取,将提取液减压浓缩,获草苁蓉醇提取物1.86 kg。将醇提取物加水溶解,在等体积二氯甲烷中进行萃取分离。取其水层提取物,上MCI-gel CHP20P凝胶柱(Mitsubishi Chemical Co.),用10%-100%甲醇梯度洗脱,收集50%甲醇洗脱成分,经高效液相层析分离得到IGBR。2.建立CCI4肝损伤模型：大鼠腹腔内注射CCl4(1ml/kg),制备大鼠急性肝损伤模型。3.动物分组及处理：将雄性Wistar大鼠,重(160-180 g)50只,随机分成5组,每组10只,即正常对照组(groupⅠ)、模型组(groupⅡ)、IGBR低剂量组(groupⅢ)、IGBR高剂量组(groupⅣ),、益肝灵组(groupⅤ)。首先将IGBR和益肝灵溶于0.5%羧甲基纤维素中,然后IGBR低、高剂量组和益肝灵组分别灌胃IGBR (100、200mg/kg)和益肝灵(50mg/kg),正常对照组和模型组以等体积的0.5%羧甲基纤维素溶液灌胃,每天一次,连续7天。第7天最后一次给药后1小时,将50%CCL4橄榄油按1 ml/kg剂量注射至Ⅱ-Ⅴ组大鼠腹腔内,而Ⅰ组只注射同体积的橄榄油。腹腔注射CC1416h后,断头取血及肝组织,进行肝组织病理学观察。分离血清,测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、丙二醛(MDA)、脂氢过氧化物(LOOH)、谷胱甘肽(GSH),测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、铜锌超氧化物岐化酶(Cu/Zn-SOD)、二氧化锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、脂氢过氧化物(LOOH)、谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮合酶(iNOS)、细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达。结果：HE染色结果表明,IGBR高、低剂量组和益肝灵组,大鼠CCl4所致肝损伤明显减轻。在大鼠血清中,与正常组相比,CC14肝损伤模型组的ALT、AST、TNF-α水平明显升高；与模型组比较,IGBR高、低剂量组和益肝灵组明显降低CCl4所致急性肝损伤大鼠血清ALT、AST(除IGBR低剂量组外)、TNF-α水平,IGBR高剂量组和益肝灵组血清ALB水平明显提高。在大鼠肝组织中,与正常组比较,CCl4肝损伤模型组的SOD、Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、GPx、GR和CAT活性降低；与模型组比较,IGBR高剂量组和益肝灵组肝组织中的SOD、Mn-SOD、GPx(益肝灵组除外)、GR和CAT(包括IGBR低剂量组)活性升高。在血清及肝组织中,与模型组比较,IGBR高剂量组和益肝灵组MDA含量都明显降低,IGBR低剂量组的MDA只有在肝组织中明显降低,且IGBR高剂量组LOOH含量都明显降低,而益肝灵组的LOOH只有在血清中明显降低,IGBR高剂量组和益肝灵组中GSH的活性明显升高；与IGBR低剂量组比较,IGBR高剂量组GSH活性明显升高。与模型组比较,IGBR高剂量组和益肝灵组对CCl4诱导的肝组织iNOS的表达异常增高有显著降低作用,IGBR高剂量组对CCl4诱导的肝组织CYP2E1蛋白表达明显增高,IGBR高剂量组对CCl4诱导的肝组织CYP2E1-特异的单氧合酶的活性有明显增高作用,且同IGBR低剂量组比较,活性明显增高。说明IGBR高剂量组能抑制肝iNOS的表达,提高CYP2E1蛋白含量及恢复其功能。结论：草苁蓉环烯醚萜苷对CC14所致的大鼠急性肝损伤具有保护作用。机制可能与草苁蓉环烯醚萜苷抑制脂质过氧化、增高抗氧化酶活力、抑制炎症反应、恢复CYP2E1功能和抑制iNOS的表达有关。第二部分草苁蓉环烯醚萜苷对H22小鼠肝癌移植瘤的抑瘤作用目的：目前草苁蓉提取物环烯醚萜苷的研究尚不多见,本研究通过建立H22肝癌移植瘤模型,探讨草苁蓉环烯醚萜苷对小鼠H22移植瘤的生长抑制作用。方法：1. IGBR的制备：将10kg草苁蓉全草切碎后用90%乙醇提取,将提取液减压浓缩,获草苁蓉醇提取物1.86 kg。将醇提取物加水溶解,在等体积二氯甲烷中进行萃取分离。取其水层提取物,上MCI-gel CHP20P凝胶柱(Mitsubishi Chemical Co.),用10%-100%甲醇梯度洗脱,收集50%甲醇洗脱成分,经高效液相层析分离得到IGBR。2.建立H22皮下移植瘤模型：常规方法复苏H22小鼠肝癌细胞,取0.2mL细胞悬液注射到雄性昆明小鼠腹腔内,连续传两代。无菌操作取第2代腹水,用无菌生理盐水稀释,调整细胞密度为1×107个/mL取0.2mL瘤细胞悬液接种到雄性昆明小鼠的右腋窝皮下[4]。3.动物分组及处理：接种后第二天,随机分成模型组、IGBR高剂量组、中剂量组、低剂量组和5-氟尿嘧啶(5-Fu)组,每组各10只。IGBR高、中和低剂量组分别按400、200和100 mg/kg-d剂量ig给药,每日1次,共10次；5-Fu组按25 mg/kg·d剂量隔日ip给药,共5次；模型组则以生理盐水替代药物ig给药。各组动物给药第10 d停药,禁食不禁水16 h后处死。另设正常组10只,每天生理盐水ig给药,共10 d。取瘤、脾脏、胸腺并称重,计算抑癌率及瘤组织病理学观察。眼眶取血,分离血清TNF-α、IL-2、T-AOC和MDA含量。琼脂糖凝胶电泳技术分析药物对DNA的作用,测定微血管密度(MVD),免疫组织化学法检测瘤组织中VEGF、KDR和HIF-1α表达。结果：1.IGBR对肝癌H22移植瘤小鼠抑癌率的影响：IGBR低、中、高剂量组小鼠肝癌H22移植瘤的生长有明显抑制作用。与模型组比较,IGBR低、中、高剂量组和5-Fu组肝癌H22移植瘤小鼠瘤重显著减轻。与5-Fu组比较,IGBR各剂量组小鼠瘤重均显著增高,IGBR各剂量组抑癌率明显低于5-Fu组。2. IGBR对小鼠试验后体重及免疫器官指数的影响：试验末期IGBR高剂量组小鼠脾指数与模型组比较差异显著,与IGBR低、中剂量组比较差异显著。5-Fu组小鼠体重、胸腺指数和脾指数均低于模型组,也低于IGBR各组。3. IGBR对血清TNF-a和IL-2水平的影响：与正常组比较,模型组小鼠TNF-a显著增高,IL-2显著降低。与模型组比较,IGBR低、高剂量组和5-Fu组TNF-a显著降低,而IGBR各剂量组和5-Fu组IL-2显著增高。4. IGBR对血清抗氧化指标的影响：与正常组比较,模型组小鼠MDA含量显著降低,但T-AOC无显著性差异。与模型组比较,IGBR各剂量组小鼠血清MDA含量显著降低,血清T-AOC显著提高；同时,IGBR各剂量组小鼠血清T-AOC也明显高于5-Fu组；IGBR高剂量组T-AOC与IGBR低、中剂量组比较差异显著。5. IGBR可激活核酸内切酶,在核小体间规则地切割DNA,而且各浓度的药物诱导核酸内切酶切割DNA小片断的大小相等。6.模型组小鼠肿瘤组织毛细血管大量增生,IGBR组和5-Fu组肿瘤边缘区毛细血管明显减少。与模型组比较,IGBR组平均血管密度均有明显减少,并呈现量-效关系。7.免疫印迹结果显示：与模型组组比较,在IGBR组、5-Fu组中血管生成及调控因子VEGF、KDR和HIF-1α的蛋白表达水平分别有明显差异,这些因子的表达水平随着IGBR浓度的增加而分别减少。结论：IGBR对H22移植瘤具有明显的抑制作用,其作用可能与其抑制新生血管生成、增高机体免疫机能和抗氧化能力有关。