研究背景:肺癌是目前世界上发病率高,死亡率高的恶性肿瘤之一。近年在肺癌的治疗,尤其在是靶向治疗和免疫治疗上取得了较大的进展,但仍不能改善肺癌愈后较差的现状。早期诊断是改善恶性肿瘤愈后的有效办法。目前肺癌的早期筛查的手段主要为影像诊断,没有敏感度和特异度均满意的外周血肿瘤标记物。近年,对外泌体和Micro RNA(简称miRNA)的研究有了突破性的进展,诸多研究发现二者几乎参与了肿瘤发生、发展的每一个环节。因此外泌体内的miRNA具有成为新的肿瘤标记物的潜能。研究目的:1.掌握从外周血中分离提取外泌体,以及从外泌体中提取miRNA的实验方法。2.明确早期肺腺癌患者手术前、术后7天以及正常人血浆外泌体中miRNA的表达情况。3.筛选出差异性表达的miRNA,并验证其在早期肺腺癌及正常人中的差异性表达;4.探讨筛选出的miRNA作为早期肺腺癌肿瘤标记物的可能性;5.初步预测筛选出的miRNA的靶基因以及可能参与的信号通路。研究方法:1.采用超速低温离心的方法从血浆中分离提取外泌体,再使用miRNA提取试剂盒的从外泌体中提取miRNA。2.应用二代测序技术(Illumina Genome Analyzer Ⅱx基因分析系统)对提取的miRNA进行测序分析。3.SPSS软件进行统计分析测序结果,Graphpad prism7.0软件制作图表;4.qRT-PCR技术验证miRNA的表达;研究结果:hsa-mir-10b-5p、hsa-mir-192-5p、hsa-mir-151a-5p 在肺腺癌样本中的表达较正常人明显上调,hsa-mir-10b-5p在术后外周血中的表达较术前明显下降,hsa-mir-192-5p和hsa-mir-151a-5p术前与术后的表达变化并不明显。另外,这3个miRNA的表达与肺腺癌的生存预后有显著关系。在正常人与早期肺腺癌患者的对比验证实验中,这miRNA也呈现出相同的差异性表达。研究结论:筛选出的 hsa-mir-10b-5p、hsa-mir-192-5p、hsa-mir-151a-5p,这 3 个miRNA在早期肺癌和正常人的样本中的表达有较为显著的差异。通过验证实验证实这些差异性的表达是可信的。进一步预测了它们的靶基因及可能参与的信号通路,其中这三个miRNA很可能参与到肿瘤细胞的代谢通路、PI3K-Akt信号通路及MAPK信号通路等,这几个信号通路,在肿瘤的发生及发展过程中起到至关重要的作用,进而证实了它们具有成为肿瘤诊断标记物的潜在可能。