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第一部分GSK-3β在1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氢吡啶致C57BL／6小鼠多巴胺能神经元损伤模型不同脑区的表达变化目的探讨糖原合成酶(Glycogen Synthase Kinase-3β，GSK-3β)在1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenvl-1，2，3，6-tetrahvdropvridine，MPTP)致C57BL／6小鼠多巴胺能神经元损伤模型中不同脑区不同时程的表达变化。方法采用腹腔注射MPTP制备C57BL／6小鼠PD模型。40只雄性C57BL／6小鼠，随机分为8组(n=5只)：对照组、MPTP0d组、MPTP1d组、MPTP2d组、MPTP4d组、MPTP7d组、MPTP14d组、MPTP21d组。在末次注射MPTP后的相应时间将动物处死，Western blot法检测腹侧中脑、纹状体、皮质区磷酸化GSK-3β(phosphorylatedGSK-3β，p-GSK-3β)以及总GSK-3β的表达；免疫组化法检测腹侧中脑GSK-3β阳性细胞表达；免疫荧光法检测腹侧中脑GSK-3β和凋亡细胞的共定位表达。结果MPTP显著增加了C57BL／6小鼠腹侧中脑p-GSK-3β和总GSK-3β的水平，然而p-GSK-3β：总的GSK-3β比值降低，所以非磷酸化的GSK-3β是增高的。免疫组织化学发现总的GSK-3β在腹侧中脑明显升高。免疫荧光双标显示GSK-3β的增高与神经元的凋亡有明显的关系。MPTP对于纹状体区与皮质区GSK-3β及p-GSK-3β的表达均无明显影响。结论MPTP所致腹侧中脑区GSK-3β蛋白表达增加可能与PD发生发展的病理机制有关。第二部分β-catenin在1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氢吡啶致C57BL／6小鼠多巴胺能神经元损伤模型不同脑区的表达变化目的探讨β-catenin在MPTP致C57BL／6小鼠多巴胺能神经元损伤模型中不同脑区不同时程的表达变化。方法采用腹腔注射MPTP制备C57BL／6小鼠PD模型。40只雄性C57BL／6小鼠，随机分为8组(n=5只)：对照组、MPTP0d组、MPTP1d组、MPTP2d组、MPTP4d组、MPTP7d组、MPTP14d组、MPTP21d组。在末次注射MPTP后的相应时间将动物处死，Western blot法检测腹侧中脑、纹状体、皮质区磷酸化β-catenin(phosphorylatedβ-catenin，p-β-catenin)以及总β-catenin的表达；免疫组化法检测腹侧中脑β-catenin阳性细胞表达；免疫荧光法检测腹侧中脑β-catenin和Hochest33258的共定位表达。结果MPTP致伤显著增加了C57BL／6小鼠腹侧中脑总β-catenin的水平，然而p-β-catenin并没有明显的改变。皮质、纹状体β-catenin的表达无明显改变。免疫组化说明MPTP处理后第7天β-catenin在腹侧中脑区域发生了核转位。免疫荧光双标也显示MPTP处理的第7天β-catenin的表达增高，并且发生了核转移。结论MPTP所致腹侧中脑区β-catenin蛋白表达增加可能与PD发生发展的病理机制有关。第三部分胰岛素样生长因子-1对1-甲基-4-苯基吡啶离子致PC12细胞损伤的保护作用中Akt和Wnt通路的作用目的研究胰岛素样生长因子-1(Insulin Like Growth factor-1，IGF-1)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium，MPP~+)致PC12细胞损伤保护作用中Akt／GSK-3β通路以及Wnt通路的作用。方法以250μmol／L的MPP~+损伤PC12细胞作为帕金森病细胞模型，实验分组如下：空白对照组、LY294002组、LiCl组、MPP~+组、MPP~++IGF-1组、MPP~++LiCl组、MPP~++IGF-1+LY294002组。空白对照组、LY294002组、LiCl组、MPP~+组、MPP~++IGF-1组分别给予F12培养基加血清、10μmol／L的LY294002、20mmol／L的LiCl、250μmol／L的MPP~+、250μmol／L的MPP~++100nmol／L的IGF-1处理；MPP~++LiCl组先给予20mmol／L的LiCl，1h后给予250μmol／L的MPP~+处理；MPP~++IGF-1+LY294002组先给予10μmol／L的LY294002，1h后给予250μmol／L的MPP~++100nmol／L的IGF-1处理。孵育24h后采用MTT法检测细胞存活率，吖啶橙(AO)／溴化乙啶(EB)双染法检测细胞凋亡；孵育15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h之后采用Western Blot免疫印迹法检测Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、p-β-catenin蛋白表达。结果①MPP~+和IGF-1+MPP~+均可以诱导p-Akt增加；加用LY294002后p-Akt表达降低。②应用LY294002拮抗了IGF-1对于PC12细胞的保护作用。③MPP~+和IGF-1+MPP~+均可以诱导p-GSK-3β增加；加用LY294002后p-GSK-3β表达降低。④应用LiCl拮抗了MPP~+对于PC12细胞的损伤作用。⑤MPP~+和IGF-1+MPP~+均未诱导β-catenin和p-β-catnin的表达改变。结论：IGF-1对MPP~+致PC12细胞损伤的保护作用是通过Akt／GSK-3β通路发挥作用，而不是wnt通路。第四部分胰岛素样生长因子-1对1-甲基-4-苯基吡啶离子致PC12细胞损伤的保护作用中ERK通路的作用目的研究胰岛素样生长因子-1(Insulin Like Growth factor-1，IGF-1)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium，MPP~+)致PC12细胞损伤保护作用中ERK通路的作用。方法以250μmol／L的MPP~+损伤PC12细胞作为帕金森病细胞模型，实验分组如下：空白对照组、PD98059组、MPP~+组、MPP~++IGF-1组、MPP~++IGF-1+PD98059组。空白对照组、PD98059组、MPP~+组、MPP~++IGF-1组分别给予F12培养基加血清、50μmol／L的PD98059组、250μmol／L的MPP~+、250μmol／L的MPP~++100nmol／L的IGF-1处理；MPP~++IGF-1+PD98059组先给予50μmol／L的PD98059，1h后给予250μmol／L的MPP~++100nmol／L的IGF-1处理。孵育24h后采用MTT法检测细胞存活率，吖啶橙(AO)／溴化乙啶(EB)双染法检测细胞凋亡；孵育15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h之后采用WesternBlot免疫印迹法检测ERK、p-ERK蛋白表达。结果①MPP~+可以诱导p-ERK的短暂表达增加，而IGF-1和MPP~+并没有改变ERK的表达改变，加用PD98059后p-ERK表达降低。②应用PD98059并不能拮抗IGF-1对于PC12细胞的保护作用。结论ERK通路并没有在IGF-1对MPP~+致PC12细胞损伤的保护作用中发挥作用。