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目的 探讨5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮(TTF1-NP)对人肝癌HepG-2自噬的影响及其相关的作用机制方法通过MTT法检测不同浓度(15-240μM)的TTF1-NP作用不同时间(12 h,24 h,48h)后对HepG-2细胞存活率的影响；利用透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)观察细胞中自噬体的形成；Western Blot检测TTF1-NP在不同浓度和不同时间下作用HepG-2细胞后自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达,及PI3K/Akt/mTOR通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR和MAPK/JNK通路中p-JNK的蛋白表达情况。结果1.MTT法细胞活力检测：TTF1-NP能够降低HepG-2细胞的存活率,并且随着药物浓度和作用时间的增加,抑制增殖作用越明显,且呈现一定的浓度-时间依赖性,差异具有统计学意义。2.透射电子显微镜检测：TTF1-NP作用后,HepG-2细胞中有典型双层膜结构的自噬体及单层膜的自噬溶酶体出现,提示TTF1-NP诱导HepG-2细胞自噬的产生。3.自噬标志蛋白检测：利用Western Blot对LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白检测得出,对照组中,两种蛋白表达水平较低,随着药物浓度及作用时间的增加,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平逐渐增加,自噬水平升高。4. PI3K/Akt/mTOR通路蛋白检测：Western Blot检测结果显示,对照组细胞p-Akt, p-mTOR表达水平较高,随着TTF1-NP药物浓度和作用时间增加,二者的表达逐渐降低；加入PI3K/Akt/mTOR通路激动剂insulin后,与对照组相比,insulin+对照组中的p-Akt, p-mTOR表达升高(P<0.05); TTF1-NP+insulin组中p-Akt, p-mTOR较TTF1-NP组表达升高(P<0.01), LC3-Ⅱ表达降低(P＜0.01),差异具有统计学意义。5. MAPK/JNK通路蛋白检测：Western Blot检测发现,p-JNK随着TTF1-NP药物浓度和作用时间的增加表达逐渐升高。加入JNK抑制剂SP600125后,TTF1-NP+SP600125组中的p-JNK, LC3-Ⅱ的蛋白水平较TTF1-NP组降低,差异显著,而与对照组相比,二组中的两蛋白显著升高(P<0.01)。结论TTF1-NP可以诱导人肝癌HepG-2自噬。TTF1-NP诱导人肝癌HepG-2细胞自噬的作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路及激活MAPK/JNK信号通路有关。