论文部分内容阅读
目的:探讨眼镜蛇毒膜毒素-12(membrane toxin-12, MT-12)体内局部用药对膀胱肿瘤的抑制作用,并对MT-12能否诱导体外培养的膀胱癌细胞凋亡进行研究。方法:Balb/c裸小鼠肩背部皮下注射人膀胱癌细胞(E-J)悬液,建立皮下移植瘤动物模型。皮下肿瘤直径达6mm时,根据MT-12用药量的大小,将24只动物随机分为高剂量组(0.8mg/kg)、中剂量组(0.4mg/kg)、低剂量组(0.2mg/kg)和对照组4组,每组6只动物。实验组分别按不同剂量在瘤周皮下注射MT-12,隔日注射一次,共注射10次,对照组瘤周皮下注射等量生理盐水,绘制肿瘤生长曲线。停药后次日杀死所有动物,计算抑瘤率。体外培养人膀胱移行细胞癌细胞株E-J和BIU-87,终浓度为3μg/ml的MT-12分别与贴壁生长的两细胞株作用一定时间后,HE染色、Hoechst33342染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡的DNA片段。结果:MT-12的抑瘤作用明显,高、中、低剂量组的抑瘤率分别为93.2%、36.9%、13.6%,抑瘤作用与剂量相关,高、中剂量组瘤重均较对照组低(P<0.001),低剂量组瘤重和对照组差异无显著性(P>0.05)。光镜和透射电镜下均能观察到凋亡细胞的核固缩、染色质边集、核碎裂、凋亡小体形成等形态学特征。MT-12与两株细胞分别作用12h、24h和36h,流式细胞术检测的E-J细胞早期凋亡率分别为0.51%、1.49%和2.29%,BIU-87细胞早期凋亡率分别为59%、32.78%和5.19%,两株细胞的阴性对照组早期凋亡率分别为0.03%和0.77%。DNA电泳未能检测到典型的E-J和BIU-87细胞凋亡的DNA ladder。结论:MT-12局部用药能抑制Balb/c裸小鼠皮下膀胱肿瘤的生长,且抑制作用与用药剂量相关。MT-12能诱导体外培养的E-J和BIU-87细胞凋亡,诱导凋亡可