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菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)原产中国,是世界重要盆栽、切花和地被花卉。菊花有着悠久的栽培历史,在中国传统文化和花卉产业中具有极其重要的位置。菊花多为短日照品种,于秋季开放。同时也有对光周期敏感性较低的日中性品种,此类菊花的花期在夏季,其花芽分化依赖低温诱导途径(春化作用)。已有实验证明夏菊开花与低温诱导的相关性,然而夏菊响应春化作用的具体机制尚不明确,其中发挥关键作用的基因也并不清楚。本研究旨在探究夏菊对春化作用的响应,根据模式植物拟南芥和其它物种已有的报道,克隆涉及春化作用的关键基因FLC(FLOWERINGLOCUSC),研究其在夏菊春化诱导中的作用。主要内容和结论如下:1.以’优香,、’切大黄’、’早黄’、’长紫,、’夏黄’、’夏白,、’八海,、’丰韵里,、’黑心黄’、’Q08-22-2,、’Q08-22-3’、’QX-147,、’QX-024,和’QD-043’这14个夏菊品种的大田苗为材料,取带腋芽的茎段消毒获得无菌苗。取无菌苗叶片切叶盘,以MS培养基为基础培养基,通过添加不同浓度的6-BA和NAA组合进行筛选,建立再生体系。选择再生率最高、生长周期最短的品种和再生体系,为夏菊开花相关基因的遗传转化工作奠定基础。结果表明,’优香’在14个品种中愈伤组织形成率和出芽率最高,出芽数量最多,褐化率最低,最适于用作转基因受体。最适于诱导’优香’再生的体系为MS+6-BA 2.0 mg-L-1+NAA 0.5 mg·L-1。2.夏菊’优香’(’Yuuka’)开花抑制基因CmFLC-like1的cDNA全长序列的克隆。获得CmFLC-like1cDNA全长为945bp,开放阅读框(ORF)为636bp,编码一条211个氨基酸残基的多肽,且具有典型的MADS结构域。同源性分析表明,CmFLC-like1 与葡萄(Vitis vinifera)VvFLC、龙眼(Dimocarpus longan)DlFLC 的同源性最高,分别为55%和52%。进化树聚类分析表明,CmFLC-like1蛋白与拟南芥、核桃的FLC遗传距离最近。亚细胞定位表明,CmFLC-like1基因定位在核上。在酵母体系中发现CmFLC-like1基因没有转录激活活性,拟南芥原生质体转化发现具有抑制活性。营养期不同组织器官的RT-PCR表明,CmFLC-like1在叶片中表达量最高,茎、茎尖中次之,根中最少。低温(4℃)可抑制CmFLC-like1表达,且处理时间越长,抑制作用越明显。为进一步研究CmFLC-like1功能,进行了拟南芥的遗传转化。3.拟南芥AtFLC转化菊花。使用Gateway系统构建pMDC43-AtFLC载体后通过冻融法转入农杆菌EHA105感受态细胞中,再使用根瘤农杆菌介导法侵染菊花’优香’的叶盘,获得3个基因株系。