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目的:通过体外实验明确mTOR-I对CD4及CD8 T细胞细胞因子IL-2及INF-γ分泌功能的影响。从而探讨mTOR-I对T淋巴细胞亚型(CD4及CD8 T细胞)免疫功能的影响。并了解其免疫抑制功能与环孢素A相比是否有差异。 方法:提取小鼠脾脏并分离淋巴细胞,通过流式细胞分选技术分离出CD4和CD8 T细胞,单独培养。按对照组、环孢素A组以及mTOR-I雷帕霉素(Rapa)组分组,共培养48小时。通过实时荧光定量RT-PCR法检测各组IL-2及INF-γ mRNA的表达。 结果:提取的小鼠脾脏淋巴细胞经流式细胞仪分选,其中CD4 T细胞占细胞总数12.1%,CD8T细胞占细胞总数5.7%。共培养48小时后行Real-time PCR示:CD4T细胞中Rapa处理组IL-2 mRNA相对表达量为对照组的65.0%,CsA处理组IL-2 mRNA相对表达量为对照组的62.0%;CD8细胞中Rapa处理组IL-2 mRNA相对表达量为对照组的40.5%,CsA处理组IL-2 mRNA相对表达量为对照组的42.7%。CD4T细胞中Rapa处理组INF-γ mRNA相对表达量为对照组的66.3%,CsA处理组INF-γ mRNA相对表达量为对照组的52.2%;CD8细胞中Rapa处理组INF-γ mRNA相对表达量为对照组的49.5%,CsA处理组INF-γ mRNA相对表达量为对照组的42.4%,各组间运用独立样本t检验,P<0.05。CD4及CD8 Rapa和CsA组IL-2、INF-γ mRNA表达均无明显差异(P>0.05)。 结论:1、运用流式细胞技术分选T淋巴细胞亚型相比其他方法速度快,方便,纯度高。2、mTOR-I可以显著降低CD4和CD8 T淋巴细胞IL-2和INF-γ mRNA的表达。同时其抑制IL-2和INF-γ mRNA表达的能力与环孢素A相比无明显差异。