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目的 研究bFGF在转染bcl-2基因治疗大鼠局灶性脑缺血的表达,探讨转染bcl-2基因治疗大鼠局灶性脑缺血的作用,及其作用机制是否与bFGF蛋白的表达有关。 方法 取99只体重280-300g的Wistar大鼠,随机分配到3组中,分别为MCAO组(对照组n=33),颈内动脉注射空质粒组(质粒对照组n=33),颈内动脉注射质粒pLXSN介导bcl-2基因组(bcl-2组n=33),每组再随机分成为缺血再灌注24h、48h和72h,3个亚组。采用改良Longa线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉缺血2小时模型,2小时撤出渔线,实现再灌注。大鼠右侧肢体活动障碍,表示模型成功。缺血再灌注后3小时向左颈内动脉分别注射空质粒pLXSN、质粒重组体pLXSN-bcl-2。注射成功的大鼠模型在缺血再灌注24h、48h和72h做如下测定并进行统计分析。 1.脑梗死体积测定:测定梗死体积的大鼠,直接断头、取脑,将大脑每2mm切片,采用TTC(红四氮唑)染色,4%多聚甲醛固定,梗死部分呈白色,正常部分呈红色。再应用显微图像分析系统计算脑缺血再灌注24h、48h、72h后的梗死体积。 2.免疫组化测定:实验大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(3.5ml/kg),然后以生理盐水及4%多聚甲醛经左心窒进行心脏灌注,固定,石蜡包埋,连续冠状切片(厚6μm),应用SABC法,bcl-2免疫组化测定一抗为小鼠抗人IgG,bFGF免疫组化测定一抗为小鼠抗bFGF蛋白前体,二抗为生物素化山羊抗小鼠IgG,DAB显色剂,常规脱水,透明,树胶封片。每个标本取两张切片,分别在高倍镜(400×)下随机观察额顶叶及海马区不重叠的8