研究背景和目的:紧密连接蛋白是存在于上皮细胞与内皮细胞之间的一种蛋白质,其作用是保持细胞间结构的完整性。OCCLUDIN蛋白作为紧密连接蛋白中主要一种类型,它的结构或表达发生变化会导致紧密连接结构及功能的改变,最终引起一些临床疾病的发生。研究发现,OCCLUDIN在多种肿瘤组织中表达异常,且OCCLUDIN与肿瘤细胞增殖、凋亡和侵袭迁移等有密切关系。而目前关于OCCLUDIN对非小细胞性肺癌发生发展影响及其作用机制尚不清楚。因此,本研究主要通过荧光定量PCR、Western blot、CCK-8法、流式细胞术、transwell实验、肿瘤细胞原位种植转移模型建立等方法,在体内外探讨OCCLUDIN对非小细胞性肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的影响。研究方法:收集非小细胞肺癌癌组织和癌旁正常组织标本,采用荧光定量PCR和Western blot技术分别检测组织中OCCLUDIN mRNA和蛋白表达水平。OCCLUDIN siRNA转染非小细胞肺癌细胞SPC-A1 48h后,采用CCK-8法检测OCCLUDIN对SPC-A1细胞增殖影响,并通过建立肿瘤细胞原位种植转移模型在体内验证OCCLUDIN对SPC-A1细胞增殖影响,使用PI单染方法检测OCCLUDIN对SPC-A1细胞周期的影响,使用Annexin V-APC/7-AAD双染方法检测OCCLUDIN对SPC-A1细胞凋亡率的影响,采用Western blot技术检测细胞凋亡与PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况以及采用transwell实验检测肿瘤细胞侵袭迁移的情况。研究结果:检测非小细胞性肺癌组织标本发现癌组织中的OCCLUDIN mRNA和蛋白平均表达水平均高于癌旁正常组织且差异有统计学意义（P<0.001）。OCCLUDIN在体外对SPC-A1细胞增殖的影响研究发现:siOCLN组细胞分别在24h、48h、72h、96h和120h的细胞增殖能力较control组和siCtrl组均明显降低（P<0.001）。OCCLUDIN在体内对对SPC-1细胞增殖的影响检测发现:SPC-A1细胞种植后,第16天开始,两组SPC-A1细胞在裸鼠内生长逐渐加速,且siCtrl组SPC-A1细胞在裸鼠内生长速度比siOCLN明显加快,肿瘤大小差异显著（P<0.001）。OCCLUDIN对SPC-A1细胞周期的影响检测发现:control组其G1期细胞有58.2±4.6%,S期细胞有24.2±2.4%,G2期细胞有17.6±1.2%;siCtrl组其G1期细胞有58.0±4.2%,S期细胞有22.3±2.2%,G2期细胞有19.7±1.5%;siOCLN组G1期细胞有70.5±5.2%,S期细胞有18.8±1.4%,G2期细胞有10.7±0.8%。siOCLN组SPC-A1细胞中S期和G2期细胞比例相较于control组和siCtrl组显著降低（P<0.05）,且G1期细胞比例相较于control组和siCtrl组显著升高（P<0.05）。OCCLUDIN对SPC-A1细胞凋亡的影响检测发现:control组SPC-A1细胞凋亡率为9.4±0.6%,siCtrl组SPC-A1细胞凋亡率为9.1 ±0.5%,siOCLN组SPC-A1细胞凋亡率为27.4±2.1%,siOCLN组与control组和siCtrl组比较差异显著（P<0.001）;同时,siOCLN组Bax、caspase-3、caspase-9、AIF和CytC等凋亡相关蛋白水平较control组和siCtrl组表达明显升高（P<0.05）,而抗凋亡蛋白Bc12水平较control组和siCtrl组表达明显下降（P<0.01）。OCCLUDIN对SPC-A1细胞侵袭迁移的影响检测发现:siOCLN组侵袭迁移能力与control组和siCtrl组比较明显降低且具有显著性差异（P<0.05）。OCCLUDIN调控SPC-A1细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的分子机制研究发现:siOCLN组AKT和PI3K蛋白磷酸化水平较control组和siCtrl组明显降低（P<0.01）。研究结论:OCCLUDIN可促进SPC-A1细胞的增殖及侵袭迁移,并影响SPC-A1细胞周期进程。OCCLUDIN可通过调控线粒体凋亡途径抑制SPC-A1细胞凋亡。我们进一步发现OCCLUDIN可能通过PI3K/Akt信号通路调控SPC-A1细胞增殖、凋亡和侵袭迁移。以上研究发现为进一步了解OCCLUDIN的生物学功能研究提供了理论依据,也为OCCLUDIN未来可能作为非小细胞肺癌靶向治疗分子提供了新的实验证据。