【摘 要】
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冷受体TRPM8是瞬时受体电位(TRP)阳离子通道家族的成员,参与了多种人体的生理病理过程,包括疼痛转导、离子稳态、温度调节以及肿瘤的发生等多种细胞功能,因此,TRPM8是重要的疼痛和癌症的靶点。但是,目前人源TRPM8的结构还未被解析,大大阻碍了人们对于TRPM8分子机制的认识和靶点药物的研发。为了解析高分辨率人源TRPM8结构,本研究利用哺乳动物表达系统筛选了不同的克隆提高蛋白产量,以及筛选不
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冷受体TRPM8是瞬时受体电位(TRP)阳离子通道家族的成员,参与了多种人体的生理病理过程,包括疼痛转导、离子稳态、温度调节以及肿瘤的发生等多种细胞功能,因此,TRPM8是重要的疼痛和癌症的靶点。但是,目前人源TRPM8的结构还未被解析,大大阻碍了人们对于TRPM8分子机制的认识和靶点药物的研发。为了解析高分辨率人源TRPM8结构,本研究利用哺乳动物表达系统筛选了不同的克隆提高蛋白产量,以及筛选不同去污剂以提高蛋白稳定性,最终得到高产量和高纯度的人源TRPM8蛋白。同时,我们成功组装TRPM8蛋白于纳米圆盘之中,其抗原可用于免疫获得治疗TRPM8相关疾病如慢性疼痛、冷疼痛和偏头痛等的抗体。此外,良好的生化和结构数据表明,利用单分子冷冻电镜技术我们将在短期获得人源全长的TRPM8结构。
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