T.spelta var.duh.1BS染色体上温度敏感雄性不育基因的遗传特性研究及分子标记

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:qwezxcasdqwezxc
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本项研究采用周密的遗传试验,对T.spelta var.duh. 1BS染色体片段遗传效应进行了初步探讨,采用多点试验、分期播种和剪穗再生分蘖试验对温敏不育系A3314的育性转换机制、应用范围及温敏基因的遗传特点进行了研究,并采用RAPD分析方法对温敏不育基因进行了标记,获得的主要研究结果如下:1. 利用00105488.0发明专利方法,将T.spelta var.duh. 1BS染色体片段导入K型小麦不育系(K3314A),育成非1B/1R类型K型小麦不育系KTSP3314A(简称A3314),研究其遗传效应。结果表明,T.spelta var.duh.1BS染色体片段导入使非1B/1R类型K型小麦不育系具有温敏特性,且更易恢复;不育系本身不产生单倍体,其杂交种F1极少产生或不产生单倍体;农艺性状除了株高具有明显的优势外,其他均无不利的遗传效应。2.对小麦温度敏感不育系A3314的杨陵10期分期播种和8期分期剪穗再生分蘖的育性与各期孕穗至开花期间的日平均气温、空气相对湿度、日长的关系分析表明:A3314的育性具有温度敏感特性;孕穗期前后8天是育性转换的敏感时期,即减数分裂至单核期;此期处于(18.3℃温度条件则由雄性不育转换为可育;育性转换与日长无显著相关;在敏感期(18℃的可育环境下,自交结实率与空气相对湿度在40~80%范围显著正相关。3.利用小麦温度敏感不育系A3314在中国元谋、杨凌、石家庄、互助、依安、贵阳、武威7个不同纬度地点种植的自交结实率,结合各点光温条件的分析表明:A3314在中国黄淮冬麦区、云贵冬麦区、西北春麦区、东北春麦区各点,按当地小麦生产正<WP=5>季播种均表现稳定雄性不育;而在黄淮和云贵冬麦区春播(夏播)则自交结实,适宜条件下自交结实率可达60%以上。说明该温敏不育系的雄性育性受温度的制约,而与日长无明显相关。根据A3314的育性表现,推测它在中国大部分小麦产区均可安全用于杂交小麦制种。4.利用非1B/1R类型小麦K型温敏不育系A3314与Silverstar F2和BC1F1分离群体及可育条件下的1B/1R类型小麦K型温敏不育系K3314与A3314的F2代及BC1F1代分离群体的育性反应进行分析。结果表明,A3314的温敏不育性除受细胞质基因控制外,还受两对隐性核基因的控制,且呈独立遗传。其中来自T.spelta var.duh.的K型主效不育基因rfv1sp与1B/1R类型K型小麦雄性不育系K3314A的不育主效基因rfv1为一对等位基因,并具有温敏特性。5. 以温敏雄性不育系A3314为材料,以10×buffer2.5ul,25mmol/lMg2+ 2.0ul,2.5mmol/LDNTP2.0ul,引物0.2umol/l,Tag酶1.0U为依托,通过调整底物DNA的浓度进行体系优化。然后以PCR的扩增条件为基础,通过对变性、结合及延伸的温度和时间的变化来找出适应温敏小麦的最佳扩增条件。结果表明,在25ul反应体系中使用50ng的模板DNA,2mmol/lMg2+ ,0.2mmol/l dNTP,0.2umol/l引物,1U Tag酶;反应条件为94℃预变性5min,然后进行94℃变性45秒,37℃结合45秒,72℃延伸90秒,40个循环后,再72℃延伸10min,小麦RAPD扩增效果较好。6. 选取温敏小麦不育系A3314与Silverstar杂交组合的F2代高可育和高不育单株构建基因池,利用500对随机引物对其进行多态性分析。实验结果表明, S304、S310分别在不育群体和可育群体间扩增出了分子量为800bp、750bp的多态性产物,经过单株检测,2个引物所扩增的特异条带均得到重复验证,证明了这种多态性的可靠性,确定该多态性产物是与小麦温敏不育基因连锁的,可作为A3314温敏不育基因的连锁标记,统一命名为S304800、S310750。
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