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研究背景胃癌是当前最常见的消化系统肿瘤,在所有癌症中其发病率居第四位,死亡率居第二位。虽然不断有多种新型化疗药物和分子靶向药物应用于临床,但晚期胃癌的疗效仍然不佳,其5年生存率一直在15%-25%左右。所以,鉴定胃癌的早期诊断标志物以及治疗靶点对于胃癌的治疗具有非常重要的作用。雌激素相关受体(ERRs)是以核受体的保守结构域为特点,通过杂交技术发现的孤儿核受体,其中有ERRα,ERRβ和ERRγ三种类型。它与传统的配体依赖性途径完全不同,不与雌激素结合,对雌激素的刺激无应答。ERRs的生物学特点表现在没有配体存在的情况下,参与雌激素相关信号途径,与雌激素受体在很多器官(乳腺和骨骼组织)拥有相同的靶基因。近年来,很多文献报道ERRα和ERRγ的表达水平可以作为乳腺癌诊断的早期分子标志物。另外,越来越多的证据表明ERRs通过非配体依赖途径参与调控细胞的能量代谢、增殖、凋亡过程等,与肿瘤发生发展密切相关。ERRβ作为ERRs家族的成员之一,除在上述生理活动发挥重要作用以外,还在多种肿瘤中有表达,比如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等。一方面,ERRβ可能在肿瘤的发生发展中发挥了促癌基因的功能。另外,也有学者报道ERRβ在前列腺癌中表达降低。因此,我们推测ERRβ可能随癌症类型的不同,在癌症发生发展的不同阶段,ERRβ的表达和发挥的作用也有差异。而目前尚无胃癌中的ERRβ表达及作用的相关报道。研究目的检测ERRβ在胃癌组织中的表达情况,并探讨其表达水平与胃癌患者临床参数及预后的关系;探讨ERRβ对胃癌细胞增殖的影响及其分子机制,对寻找胃癌预防和治疗靶点,将有十分重要的意义。研究方法1、整理109例胃癌组织和42例癌旁组织标本,制作石蜡组织芯片,而后采用免疫组化的方法检测ERRβ在胃癌标本中的表达水平。另外,收集10例新鲜新鲜胃癌和癌旁组织,并采用PCR和WB方法检测ERRβ的m RNA和蛋白水平。2、统计免疫组化评分结果,分析ERRβ表达水平与胃癌患者临床参数之间的关系,并整理研究人群的随访资料,通过生存分析、单因素和多因素回归模型分析ERRβ表达与生存时间及预后的关系。3、在不同胃癌细胞系和胃黏膜上皮细胞系中检测ERRβ的m RNA和蛋白水平。筛选出高表达ERRβ的胃癌细胞系,并通过病毒转染的方法建立下调ERRβ表达的细胞模型。4、采用MTT法,检测下调ERRβ表达后对XN0422胃癌细胞系体外增殖能力的影响;5、采用裸鼠体内成瘤方法,检测下调ERRβ表达后对XN0422胃癌细胞系体内成瘤能力的影响;6、采用WB方法检测,下调ERRβ表达后对胃癌细胞自我更新相关指标表达的影响。研究结果1.ERRβ在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织免疫组化结果表明,ERRβ在胃癌组织中表达较强,定位于胞核,而在癌旁组织中表达强度较弱。并且随着胃癌分化程度的下降,ERRβ的表达强度逐渐增高,进一步分析显示,ERRβ在胃癌组织中的组化评分和阳性率显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义。检测了新鲜胃癌组织ERRβ表达后,发现与免疫组化结果相同,在胃癌组织中ERRβ的表达水平均明显高于癌旁组织。2.ERRβ与浸润深度、淋巴结转、分化程度密切相关;根据ERRβ免疫评分结果,进一步分析了ERRβ的表达水平与胃癌临床病理参数间的关系。结果显示:ERRβ与浸润深度(P<0.05)、淋巴结转(P<0.05)和分化程度(P<0.05)密切相关,而与年龄、性别、远处转移和肿瘤大小无关(P>0.05)。3.ERRβ的表达水平与胃癌患者预后相关,是影响胃癌预后的独立因素;生存分析表明ERRβ表达阳性患者生存时间显著低于ERRβ表达阴性者(P<0.05),说明ERRβ的表达与胃癌患者预后密切相关。单因素和多因素分析发现ERRβ阳性表达是影响胃癌预后的独立因素之一。4.ERRβ在低分化胃癌细胞系中的高表达通过PCR和WB分别检测了不同胃癌细胞系和胃黏膜上皮细胞(GES-1、AGS)中ERRβ的m RNA和蛋白表达水平。结果表明,ERRβ在胃黏膜的上皮细胞和高分化潜能的胃癌细胞系表达较低,而在低分化潜能的胃癌细胞系中表达水平较高。5.下调ERRβ可减弱胃癌细胞系的增殖能力采用MTT法检测改变ERRβ的表达后XN0422胃癌细胞增殖能力。经过1周的检测,结果表明与对照组相比,抑制ERRβ的表达后XN0422胃癌细胞的增殖能力明显减弱。6.下调ERRβ可抑制胃癌细胞的体内成瘤能力体内实验表明与对照组相比,下调ERRβ表达后,干扰组的肿瘤体积和重量明显降低,说明干扰ERRβ的表达可以抑制XN0422细胞的体内成瘤能力。7.下调ERRβ可抑制肿瘤自我更新相关指标的表达通过WB方法检测了干扰组和对照组XN0422细胞中的反映自我更新能力相关指标(Nanog和Bmi1)。结果发现,下调ERRβ表达后,与对照组相比,干扰组中Nanog和Bmi1的表达水平显著下降。研究结论1.ERRβ在胃癌中高表达,且其表达水平与胃癌的浸润深度、淋巴结转、分化程度密切和预后密切相关;2.下调ERRβ的表达可以抑制胃癌细胞增殖能力,且可能与肿瘤自我更新相关。