弓形虫(Toxoplasma gondii)是专性胞内寄生的机会性致病原虫,可以导致人畜共患的弓形虫病。弓形虫病给社会带来了巨大的经济和社会负担,是一种重要的食源性疾病。在我国,弓形虫的平均感染率为7-8%并且有逐渐上升的趋势。目的:弓形虫进入机体后,机体天然免疫通路被激活,产生一系列细胞因子和炎症因子对弓形虫进行清除。而弓形虫可以通过调控机体天然免疫通路来实现免疫逃逸。NF-κB信号通路是天然免疫中的重要通路,研究发现,弓形虫可以抑制NF-κB信号通路的激活,但是具体的作用分子以及作用机制并不清楚。本课题主要研究弓形虫Cathepsin C1(TgCPC1)蛋白对NF-κB信号通路的影响及其分子机制,为深入了解弓形虫与天然免疫之间的关系提供新的线索和思路。方法:1.用双荧光素酶报告基因方法检测TgCPC1对NF-κB启动子活性的影响。2.过表达一系列NF-κB信号通路上的组成成分,探索TgCPC1蛋白可能的作用的位点。3.用QPCR技术分析TgCPC1蛋白对NF-κB信号通路下游炎症因子表达的影响。4.Western blot技术检测TgCPC1蛋白对NF-κB信号通路蛋白表达的影响。5.RNA测序技术检测TgCPC1蛋白对TLR4-HEK293T细胞中RNA表达的影响。结果:1.双荧光素酶报告基因结果显示TgCPC1可以抑制NF-κB启动子活性。2.过表达TRAF6,IKKα,IKKβ和p65,TgCPC1都可以抑制NF-κB启动子活性,说明TgCPC1可能作用于p65或者p65下游。3.QPCR结果显示TgCPC1可以抑制IL-1β,IL-6,IL-8,IL-12和TNF-α的表达。4.Western blot结果显示TgCPC1可以抑制p65的磷酸化。5.RNA测序结果显示TgCPC1明显上调了EPO。在HEK293T细胞中,用shRNA沉默EPO后,TgCPC1不再抑制IL-6和IL-12的表达。6.TgCPC1可以上调HIF-1α,用2-MeOE2抑制剂抑制HIF-1α后,TgCPC1不再抑制NF-κB启动子活性。结论:TgCPC1可以通过抑制p65的磷酸化以及上调HIF-1α/EPO反应轴,来抑制NF-κB信号通路。