【摘 要】
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目的通过RNA干扰技术,探讨ZafA基因在烟曲霉菌生长、毒力中的重要性,为肺曲霉病新的治疗方法提供理论依据。方法用化学合成法合成siRNA,通过电转染技术将siRNA转入烟曲霉菌孢子,提取总mRNA,进行RT-PCR,观察ZafA基因mRNA表达变化。将经过不同处理的烟曲霉菌孢子通过鼻内接种于麻醉后的免疫力低下小鼠,通过G试验、观察小鼠死亡率、肺部病理改变等,了解曲霉菌在体内的生长、毒力情况,并将
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目的通过RNA干扰技术,探讨ZafA基因在烟曲霉菌生长、毒力中的重要性,为肺曲霉病新的治疗方法提供理论依据。方法用化学合成法合成siRNA,通过电转染技术将siRNA转入烟曲霉菌孢子,提取总mRNA,进行RT-PCR,观察ZafA基因mRNA表达变化。将经过不同处理的烟曲霉菌孢子通过鼻内接种于麻醉后的免疫力低下小鼠,通过G试验、观察小鼠死亡率、肺部病理改变等,了解曲霉菌在体内的生长、毒力情况,并将肺组织于沙氏琼脂培养基中培养,确定其感染的特异性及真菌的生长情况。结果（1）电转染后,siRNA干预组烟曲霉菌ZafA基因mRNA表达水平与18srRNA内参的比值为0.533±0.026,较错义链对照组1.098±0.027和PBS对照组1.082±0.012明显降低（P＜0.05）;（2）转染后siRNA干预组烟曲霉菌在沙氏琼脂培养基上生长较错义链对照组及PBS对照组明显受限（P<0.05）;（3）小鼠免疫指标:IgG造模前后分别为0.69±0.04、0.33±0.07;IgA 0.71±0.05、0.51±0.06;IgM 1.41±0.08、1.04±0.10（P＜0.05）;（4）G试验检测（1-3）-β-D葡聚糖的含量,ZafA基因siRNA干预组较其余两对照组明显降低（P＜0.05）;（5）体内实验显示siRNA干预组死亡2只,死亡率为6.3%,错义链对照组死亡16只,死亡率为53.3%,PBS对照组死亡15只,死亡率为50%。肺部病理切片显示siRNA干预组肺部损伤较错义链对照组及PBS对照组明显减轻。生存分析提示siRNA干预组小鼠的生存时间较错义链对照组及PBS对照组明显延长。肺组织沙氏琼脂培养基培养示siRNA干预组未见真菌生长,错义链对照组及PBS对照组均有烟曲霉菌生长。结论ZafA基因是烟曲霉菌体内生长和毒力的必须基因,RNA干扰技术可有效抑制该基因的表达,使其生长及毒力受限,有望成为肺部真菌感染的有效治疗方法。
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