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目的:(1)研究拉帕替尼与硼替佐米单药和联合对乳腺癌细胞生长、细胞周期以及信号传导通路的影响。(2)研究硼替佐米对拉帕替尼耐药乳腺癌细胞的活性。方法:(1)采用CCK-8法检测拉帕替尼和硼替佐米对SK-BR3细胞生长的影响;采用Chou和Talary的药物联合指数来评价两药的联合效应。采用流式细胞仪检测拉帕替尼和硼替佐米对SK-BR3细胞的细胞周期分布和凋亡的影响。采用蛋白印迹检测拉帕替尼和硼替佐米对Her2通路蛋白Her2、p-Her2及其下游效应子p-Akt、p-Erk1/2、Akt、Erk1/2表达的影响;同时检测二者对P27蛋白表达水平的影响。(2)建立拉帕替尼耐药的SK-BR3细胞株,采用CCK-8法检测硼替佐米对拉帕替尼耐药细胞增殖的影响。用流式细胞仪检测硼替佐米对拉帕替尼耐药细胞的细胞周期分布的影响。采用蛋白印迹检测硼替佐米拉对帕替尼耐药细胞Her2通路蛋白Her2、p-Her2及其下游效应子p-Akt、p-Erk1/2、Akt、Erk1/2、p-4E-BP1表达的影响;以及对P27蛋白表达水平的影响。结果:(1)拉帕替尼和硼替佐米的生长抑制作用均呈剂量依赖性;两药的联合指数(CI)等于1,呈相加作用。随着拉帕替尼浓度的提高,SK-BR3细胞的G0/G1期比例明显增加(P＜0.05);而S期的比例明显降低(P＜0.05)。硼替佐米可以使SK-BR3细胞的G2/M期比例增加,S期的比例也有降低的趋势;两药联合与单药作用结果相似。拉帕替尼和硼替佐米诱导SK-BR3细胞凋亡均与浓度有明显的相关性(P＜0.05,P＜0.05);两药联合应用后,SK-BR3细胞凋亡的比例明显增加(P＜0.05)。蛋白印迹显示拉帕替尼可以明显下调SK-BR3细胞p-Her2、p-Akt、p-Erk1/2蛋白的表达水平,这种影响表现为时间依赖性和剂量依赖性的。而对非磷酸化的Her2、Akt、Erk1/2蛋白无明显影响。与拉帕替尼相反,硼替佐米可以明显上调SK-BR3细胞p-Erk1/2蛋白的表达。拉帕替尼联合硼替佐米后,p-Her2、p-Akt蛋白的表达水平比单药下调更明显,高浓度的拉帕替尼如1μM,可以明显抑制硼替佐米对p-Erk1/2蛋白的上调作用。二者联合可以更显著地上调P27蛋白的表达水平。拉帕替尼联合硼替佐米对BT474细胞Her2信号传导通路蛋白表达的影响相对不显著。(2)硼替佐米对拉帕替尼耐药的SK-BR3细胞生长抑制作用呈剂量和时间依赖性。随着硼替佐米浓度的增加,耐药的SK-BR3细胞的G2/M期比例增加(P＜0.05),而S期的比例降低(P＜0.05)。硼替佐米可以明显下调耐药的SK-BR3细胞p-Her2、p-Akt和p-4E-BP1蛋白的表达水平,上调P27蛋白的水平,呈剂量依赖性的关系。而对非磷酸化的Her2、Akt、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白表达水平无明显影响。结论:(1)拉帕替尼与硼替佐米单药和联合应用均可抑制SK-BR3细胞的生长;二者具有相加作用;二者联合可以显著地上调SK-BR细胞P27蛋白的表达水平;更有力地抑制PI3K—Akt通路的激活;拉帕替尼可以抑制硼替佐米对Ras—MAPK通路的激活。(2)硼替佐米可以抑制拉帕替尼耐药SK-BR3细胞的增殖;抑制耐药细胞PI3K—Akt通路的激活;但对Ras—MAPK通路无明显影响;可以显著上调P27蛋白的表达。硼替佐米可能会防止或延缓SK-BR3细胞对拉帕替尼的耐药。