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目的构建BALB/c小鼠Graves病(Graves Disease, GD)模型,制备具有生物活性的抗细胞间黏附分子1(intracellular adhesion molecule-1, ICAM-1)的单克隆抗体,研究131I及抗ICAM-1单抗对GD模型小鼠的治疗效果。方法1构建BALB/c小鼠GD模型：通过对BALB/c小鼠进行腓肠肌注射重组质粒pcDNA3.1/TSHR268并在注射部位电穿孔进行免疫。检测小鼠甲状腺素(thyroxine, T4)、促甲状腺素受体氨基端蛋白抗体(thyroid stimulating hormone receptor N-terminal antibody, TRAb N)、促甲状腺素受体羧基端蛋白抗体(thyroid stimulating hormone receptor C-terminal antibody, TRAb C).对模型小鼠进行99mTcO4-显像及甲状腺病理学分析,构建GD动物模型。2制备抗ICAM-1单克隆抗体：用纯品ICAM-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,将分泌阳性细胞克隆化培养,采用小鼠体内诱生的方法大量制备单抗,纯化腹水得到有生物活性的抗ICAM-1单克隆抗体。3使用131I及抗ICAM-1单克隆抗体对GD模型小鼠进行实验性治疗：分别通过腹腔注射131I及抗ICAM-1单抗的方法治疗GD模型小鼠,检测小鼠血清T4、TRAb N抗体、TRAb C抗体水平,进行99mTcO4-显像及甲状腺病理学分析,将上述结果与对照组、空白组小鼠进行比较,对131I及抗ICAM-1单抗治疗GD模型小鼠的效果进行评价。结果1.1通过腓肠肌注射重组质粒pcDNA3.1/TSHR268并在注射部位进行电穿孔的方法可以成功构建BALB/c小鼠GD模型,阳性率为80%(24/30)。1.224只成功建模的BALB/c小鼠T4、TRAb N抗体及TRAb C抗体平均水平均较免疫前明显升高。停止免疫后,小鼠T4、TRAb N抗体及TRAb C抗体平均水平有所下降,但仍明显高于免疫前水平(P<0.05)。对照组与空白组小鼠T4、TRAb N抗体及TRAb C抗体平均水平在免疫前后未见明显变化。1.3经过4次免疫,实验组小鼠甲状腺对99mTcO4-的摄取能力较对照组及空白组明显增强,对照组与空白组小鼠之间甲状腺对99mTcO4-的摄取能力未见明显差异。1.4GD模型小鼠甲状腺较正常BALB/c小鼠体积增大。病理学检查可见GD模型小鼠甲状腺组织淋巴细胞浸润,甲状腺滤泡内胶质稀薄、颜色变淡,部分滤泡上皮细胞增生。2.1使用纯品ICAM-1蛋白对BALB/o小鼠腹腔注射,免疫3次后可达到预期免疫效果。将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与免疫成功的小鼠脾细胞进行融合可制备杂交瘤细胞。2.2192孔融合细胞中有174孔可见杂交瘤细胞生长,融合率为90.6%。其中抗体分泌阳性细胞有13孔,阳性率为7.5%。再次筛选阳性孔为3孔,分别为C9、G10、H7。3株阳性细胞经2次克隆化培养后100%均为抗体分泌阳性,且经过检测均为分泌IgG1型单抗。2.3BALB/c小鼠诱生腹水中单克隆抗体效价可达到1：200000,而杂交瘤细胞培养上清液中单抗效价仅为1：1000。2.4根据标准蛋白浓度各自对应的标准吸光度绘制蛋白定量标准曲线,得到公式：y=0.0014x+0.011,根据标准曲线及公式计算出C9、G10、H7蛋白浓度分别为917.8571μg/ml、650.000μg/ml、767.8571μg/ml。3.1抗ICAM-1单抗治疗组小鼠T4、TRAb N抗体及TRAb C抗体平均水平有不同程度下降,其中TRAb C抗体浓度平均水平降至正常。3.2131I治疗组小鼠T4、TRAb N抗体及TRAb C抗体平均水平均明显下降,其中T4平均水平低于正常,小鼠出现甲减,而TRAb N抗体及TRAb C抗体平均水平均降至正常。3.3抗ICAM-1单抗治疗组小鼠甲状腺对99mTcO4-的摄取能力较未经治疗的GD模型小鼠明显下降,达到正常水平；131I治疗组小鼠甲状腺对99mTcO4-的摄取能力低于正常水平。3.4不同方法治疗后的小鼠甲状腺病理学检查与未治疗的小鼠相比未见明显差异。结论1使用重组质粒pcDNA3.1/TSHR268免疫加电穿孔,可以成功构建BALB/c小鼠GD模型。2使用免疫杂交技术可以成功制备抗ICAM-1单克隆抗体。3131I及抗ICAM-1单抗对GD模型小鼠有治疗作用。