论文部分内容阅读
目的 探讨cyclinD1、p16、p27和Rb基因启动子区CpG岛在大肠癌发生发展过程中甲基化状态及其蛋白的表达情况，分析在大肠癌中这些基因表达的变化与DNA甲基化的关系，明确DNA甲基化在大肠癌发生发展中的作用及其与大肠癌临床生物学行为的关系，并由此寻找大肠癌早期诊断、生物学特性和预后判断的分子标记。 方法 采用PV-6000通用型二步法免疫组化染色检测大肠癌手术切缘正常粘膜上皮、癌旁组织、大肠腺瘤及大肠癌组织中cyclinD1、p16、p27和Rb蛋白的表达情况并分组，然后应用敏感的甲基化特异性PCR检测各基因启动子区CpG岛的甲基化状态。 结果 1．免疫组化结果显示：cyclinD1蛋白的表达在大肠癌发生发展过程中呈逐渐增高趋势，其在癌旁组织、腺瘤和癌组织中的表达与手术切缘正常粘膜上皮相比以及癌与癌旁组织、腺瘤相比均有显著性差异（p＜0.01或0.05），但在癌旁组织与腺瘤间cyclinD1的表达差异无显著性（p＞0.05）；p16和p27蛋白在大肠癌发生发展过程中表达均呈下降趋势，在癌旁组织、腺瘤和癌组织中的表达与手术切缘正常粘膜上皮相比以及癌与癌旁组织、腺瘤相比均有显著性差异（p＜0.01或0.05）；Rb蛋白表达在大肠癌发生发展过程中也呈逐渐下降趋势，其在癌旁组织、腺瘤和癌组织中的表达与手术切缘正常粘膜上皮相比有显著性差异（p＜0.01或0.05），但癌与癌旁组织、腺瘤相比以及癌旁组织与腺瘤间Rb的表达差异均无显著性（p＞0.05）。对于乙状结肠扭转1例和意外死亡的正常大肠粘膜组织2例pl6、p27和Rb蛋白的表达均呈阳性，而CyClinD；蛋白的表达2例呈阴性，l例呈阳性。2．甲基化特异性PCR结果显示：在大肠癌发生发展过程中 PI6、P27和 Rb基因启动子区甲基化率均呈增加趋势，cyclinD；基因启动子区甲基化率呈下降趋势，p16、p27和CyClinD；基因甲基化程度分别与pl6、p27和CyClinD；蛋白表达呈明显相关性（p＜0．of或 0．05）；而 Rb基因启动子区甲基化率虽然也呈增加趋势，但阳性率很低，并且基因甲基化程度与Rb蛋白表达也无明显相关性（p＞0刀5）。对于乙状结肠扭转 1例和意外死亡的正常大肠粘膜组织 2例 pl6和 p27基因均呈非甲基化状态，o基因2例呈非甲基化状态，二例为部分甲基化状态，CyClinD；基因均呈部分甲基化状态。3．基因甲基化与大肠癌临床生物学行为的关系结果显示：PI6和 CyClinD；基因甲基化程度在癌组织分化程度中＜0．01)、浸润深度（p＜0．05或 0．of）和有无淋巴结转移上（p＜0．05或 0．01）均有显著性差异 ； PZ 7基因甲基化程度在有无淋巴结转移上有显著性差异（P＜0．01）。 结论 CyClinD卜 p 16和 p27基因启动子区 CpG岛异常甲基化是CyClinD；高表达、p16和p27失活的主要机制，并由此导致细胞增殖周期失调在大肠癌发生发展过程中发挥着重要作用，是与大肠癌发生发展有密切关系的重要早期分子事件，并与大肠癌的临床生物学行为密切相关，可作为大肠癌早期诊断、基因治疗和判断预后的重要分子指标，为进一步深入研究DNA甲基化与肿瘤的关系是供了理论和实验依据。