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目的建立结肠癌细胞紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol,探讨结肠癌细胞对紫杉醇获得性耐药可能的分子机制并为耐药逆转研究提供良好的实验材料。方法以人结肠癌细胞株LoVo为亲本细胞,采用紫杉醇(Taxol)浓度梯度递增法诱导建立结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol。使用光学显微镜及电子显微镜观察细胞形态;cck-8法检测细胞对紫杉醇、阿霉素、5-氟脲嘧啶的药物敏感性;流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测多药耐药相关基因以及凋亡和细胞周期调控相关基因的转录和翻译情况。结果(1)建立的紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol对紫杉醇具有显著耐药性,对阿霉素(DOX)及5-氟脲嘧啶(5-FU)也产生强烈的耐药性。(2)可以观察到细胞形态与超微结构也发生了明显的变化,耐药细胞间的黏连明显少于亲本细胞,且细胞核质比略有变小,线粒体明显增多。(3)流式细胞仪测定的周期结果显示LoVo/Taxol细胞G2/M阻滞明显低于LoVo(p<0.05),凋亡结果显示其凋亡率也显著低于亲本细胞株(p<0.05)。(4)通过qRT-PCR以及Western blot分析发现耐药细胞株中多药耐药相关蛋白(MRP1)、微管相关蛋白(MAP-Tau)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)基因的转录和翻译水平显著提高,同时β微管蛋白-3(β3-Tubulin)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因在转录和翻译水平显著降低。结论我们在成功建立了人结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol的基础上,证实了耐药细胞株LoVo/Taxol的多药耐药相关蛋白(MRP1)、微管相关蛋白(MAP-Tau)以及细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)基因过表达可能是导致结肠癌细胞对紫杉醇耐药的主要因素。