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研究背景与目的:全球恶性肿瘤中,胃癌发病率与死亡率均位居前列。在中国,胃癌的死亡率也位居前列,仅次于肺癌和肝癌。MicroRNAs(miRNAs)是由19-25个左右核苷酸组成的非编码小RNA。MiRNAs本身不能直接合成编码蛋白,其通过与靶基因mRNA(3’-UTR)碱基互补配对结合,进而促进靶基因mRNA降解或抑制其翻译,在调控细胞功能中起到极其重要的作用。肿瘤生长过程依赖于不断出现的新生血管,如果没有充分的血管供应,实体肿瘤将被限制在1-2 mm(约106细胞)。肿瘤细胞可以直接或者间接募集宿主细胞,分泌产生多种血管发生促进因子,其中血管内皮生长因子(VEGFA)是目前已知作用最强、专属性最高的促血管生长因子。在肿瘤中,已经发现一些miRNAs可以靶向结合VEGFA,通过旁分泌途径影响血管内皮细胞增殖能力,迁移能力与成管能力,与肿瘤的血管新生密切相关。本次研究的目的在于探索miR-195在胃癌中的作用与功能。研究方法:我们首先在TCGA(The Cancer Genome Atlas)肿瘤数据库中筛选,并通过生物信息学预测miR-195可能直接靶向调控VEGFA在胃癌血管新生中发挥重要功能。然后在GEO(Gene Expression Omnibus)芯片数据库和临床组织标本中,我们验证miR-195在胃癌组织标本相比胃正常组织标本中表达水平差异。进一步我们在细胞学水平探索miR-195对胃肿瘤细胞自身增殖、迁移和侵袭能力影响;miR-195在胃肿瘤细胞中通过旁分泌途径对血管新生能力影响。研究结果:1.TCGA肿瘤芯片数据库中胃癌组织与胃正常组织标本中共筛选124条差异性表达miRNAs,其中75条miRNAs表达水平显著上调;49条miRNAs表达水平显著下调;通过生物信息学预测,筛选出可能直接靶向调控VEGFA候选 miRNAs:miR-195;2.GEO芯片数据库与胃癌组织标本中miR-195表达水平相比胃正常组织标本中表达水平下调;胃癌组织标本中miR-195表达水平与胃癌患者淋巴结转移,TNM分期,预后相关,是一个保护因素;3.恢复胃肿瘤细胞系中miR-195表达后,胃肿瘤细胞本身增殖能力,迁移能力,侵袭能力受到抑制;4.恢复胃肿瘤细胞系中miR-195表达后,胃肿瘤细胞通过旁分泌途径抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力,迁移能力,成管能力;5.双荧光素酶报告基因实验证实miR-195可直接靶向调控VEGFA;Western-blot实验和ELISA实验证实miR-195可调控胃肿瘤细胞合成,旁分泌VEGFA蛋白;6.敲低胃肿瘤细胞系中VEGFA表达后,胃肿瘤细胞通过旁分泌途径抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力,迁移能力,成管能力;7.miR-195在胃肿瘤细胞中靶向调控VEGFA,通过旁分泌途径抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力,迁移能力,成管能力;8.胃癌组织标本中miR-195表达水平与VEGFA蛋白表达水平负相关;与微血管计数(MVD)负相关。研究结论:1.胃癌组织标本中miR-195表达水平相比胃正常组织标本中miR-195表达水平显著下调;胃癌组织标本中miR-195表达水平与胃癌患者淋巴结转移,TNM分期、预后相关,是一个保护因素;2.miR-195可直接抑制胃肿瘤细胞生长、迁移、侵袭能力;miR-195靶向调控VEGFA,通过旁分泌途径抑制胃癌血管新生,起到抑癌基因作用。恢复胃癌组织中miR-195表达,可能是未来胃癌治疗的一个潜在靶点。