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目的:
可溶性人类白细胞G抗原(Soluble Human Leukocyte Antigen G, sHLA-G)、免疫球蛋白样转录子2/4(Immunoglobulin-like transcript receptor2/4，ILT2/4)及白细胞介素10(Interleukin10，IL10)是重要的免疫抑制性分子，能够控制免疫细胞激活及各种自身反应的应答。本研究检测类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)病人外周血血浆中免疫抑制性分子sHLA-G、IL10的水平及ILT2/4在各类免疫细胞上表达的变化，不仅探讨三者之间的相关性、还将探讨三者与RA患者DAS28得分(Disease Activity Score28)、病程、临床用药的相关性，为进一步揭示RA发生发展的机制提供线索、以及探讨其临床应用的潜在价值。
方法:
1.依据1987年美国风湿病协会对RA的诊断标准，选择46例RA患者及41例年龄和性别相匹配的健康对照。采集血液后收集其临床及实验室资料，如年龄，性别，病程，临床用药，关节肿痛数量，及血清类风湿因子(RheumatoidFactor, RF)、血沉(Erythrocyte Sedimentation Rate，ESR)、C反应蛋白(C-Reactive Protein，CRP)、抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-Cyclic Citrullinated Peptideantibody, anti-CCP)和抗核抗体(Anti-Nuclear Antibody, ANA)等数据结果。
2.流式细胞术检测新鲜外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)表面ILT2/4表达的百分率及荧光强度(mean relative fluorescenceintensity, MRFI)。研究其与疾病活动度DAS28得分、病程、临床用药以及实验室参数等的关联性。
3.收集剩余全血离心后的血浆，酶联免疫吸附法(Enzyme-linked ImmunosorbentAssay，ELISA)检测血浆中的sHLA-G及IL10的表达水平。研究它们与各类PBMCs表面ILT2/4表达的关联性、研究它们与疾病活动度DAS28得分、病程、临床用药以及实验室参数等的关联性。
4.统计分析:计量资料进行正态性检验，符合正态分布的资料用(x)±S表示，组间比较采用t检验;非正态分布的计量资料用中位数(M)和四分位数间距(Q25-Q75)表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验;计量资料间的相关性检验采用Spearman秩相关分析。检验水准均为α=0.05。
结果:
1.RA患者CD3+T细胞上表达的ILT2平均相对荧光强度显著高于健康对照组(P＜0.05)，且CD3+T细胞上表达的ILT2平均相对荧光强度与DAS28得分显著相关，尤其表现为RA高/中疾病活动度组CD3+T细胞上表达的ILT2平均相对荧光强度显著高于低疾病活动度组(P＜0.05);但并未发现与RA病程、临床用药及实验室参数存在显著相关(均P＞0.05)。
2.RA患者CD56+NK细胞中ILT2阳性表达细胞的百分比显著高于健康对照组(P＜0.05);且RA高/中疾病活动度组CD56+NK中ILT2阳性表达细胞的百分比显著高于低疾病活动度组CD56+NK中ILT2阳性表达细胞的百分比(P＜0.05);但并未发现CD56+NK中ILT2阳性表达细胞的百分比与RA病程、临床用药及实验室参数存在显著相关(均P＞0.05)。
3.CD14+单核细胞、CD19+B细胞表面表达ILT2/4的百分比、荧光强度与健康对照组无显著性差异(均P＞0.05)，并未发现与RA疾病活动度DAS28得分、病程、临床用药及实验室参数存在显著相关(均P＞0.05)。
4.RA患者与健康对照组血浆中sHLA-G分子表达水平无显著性差异(中位数:59 U/ml vs53 U/ml，P＞0.05)，并未发现sHLA-G表达与RA疾病活动度DAS28得分、病程、临床用药及实验室参数存在显著相关(均P＞0.05)。虽然sHLA-G表达与抑制性受体ILT2/4在T、B、NK淋巴细胞及单核细胞上的表达均不相关，但是血浆中sHLA-G与IL10的表达水平之间弱相关(P＜0.05)。
5.RA患者血浆中IL10分子表达水平显著高于健康对照组(中位数:90 ng/mL vs5 ng/mL，P＜0.05)，但并未发现IL10表达与RA疾病活动度DAS28得分、病程、临床用药及实验室参数间存在显著相关(均P＞0.05)。本实验发现，不仅血浆中IL10与sHLA-G的表达水平之间存在弱相关，而且IL10也与CD3+T细胞、CD19+B细胞、CD56+NK细胞上表达的抑制性受体ILT2存在弱相关(均P＜0.05)。
结论:
类风湿性关节炎患者外周血免疫细胞表达ILT2的百分比及荧光强度均异常升高，CD3+T细胞上表达的ILT2平均相对荧光强度、CD56+NK细胞表达ILT2百分比不仅异常升高，还与RA疾病活动度DAS28得分存在显著相关，说明免疫抑制分子ILT2可能参与RA炎症反应，并在RA炎症反应负反馈机制中发挥免疫逃逸作用，可作为RA诊断和治疗的新靶点。另，外周血中ILT2、sHLA-G及IL10表达弱相关，说明三者在体内免疫耐受的诱导和维持中可能起非常重要的作用。