【摘 要】
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杜氏盐藻(Dunaliella salina, D. salina)属于绿藻门绿藻纲团藻目,是一种生长在海水或盐湖的嗜盐性浮游单细胞真核绿藻。细胞形态呈梨形或椭圆形,无细胞壁,胞内有一个大的杯
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杜氏盐藻(Dunaliella salina, D. salina)属于绿藻门绿藻纲团藻目,是一种生长在海水或盐湖的嗜盐性浮游单细胞真核绿藻。细胞形态呈梨形或椭圆形,无细胞壁,胞内有一个大的杯状叶绿体,具有双鞭毛,可以在水中游动。该藻的突出特点是耐盐能力强,抗逆性极佳,可在0.05M-5M的盐水中生长,是迄今所发现的最耐盐的生物之一。 杜氏盐藻作为宿主表达外源基因,生产具有药用价值的蛋白质如血管抑素等,具有繁殖速度快、培养简单、表达产物下游纯化过程简单等优越性。在利用杜氏盐藻作为生物反应器生产药用蛋白质、口服疫苗等时,为使目的基因得到高效表达,必须寻找高活性的杜氏盐藻内源性启动子,建立杜氏盐藻的高效表达载体,使外源基因得到高水平表达,从而获取更多的具有治疗作用的外源蛋白质。 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase, E.C.4.1.1.39简称RuBisCO)是光合生物进行光合作用的关键酶,催化光合作用中的羧化反应和氧合反应,由8个大亚基(RbcL)和8个小亚基(RbcS)组成。该酶是植物可溶性蛋白中含量最高的蛋白质之一,约占50%。因此,对于RuBisCO的研究具有重要的理论意义和应用价值。在转基因研究中,RuBisCO的RbcS基因启动子作为高活性的光调控型启动子在高等植物和藻类的遗传转化中应用较多。 本研究首先以简并引物PCR和RACE(Rapid amplification of cDNA ends, cDNA末端快速扩增)方法从杜氏盐藻中克隆了RuBisCO的小亚基基因(RbcS)的全长cDNA序列。根据此cDNA序列信息,设计位于RbcS基因上游的特异引
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