【摘 要】
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鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）是导致鸡慢性呼吸道病（Chronic respiratory disease,CRD）的主要病原菌,不同品种、年龄的鸡均可常年感染,至今没有有效的防控措施,MG的致病机理有待进一步研究。研究显示,micro RNAs（miRNAs）在家禽疾病的发生和发展过程中起重要的作用,课题组前期miRNAs测序发现,鸡胚感染MG后肺组织中Le
【基金项目】
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国家自然科学基金（31972681）；
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鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）是导致鸡慢性呼吸道病（Chronic respiratory disease,CRD）的主要病原菌,不同品种、年龄的鸡均可常年感染,至今没有有效的防控措施,MG的致病机理有待进一步研究。研究显示,micro RNAs（miRNAs）在家禽疾病的发生和发展过程中起重要的作用,课题组前期miRNAs测序发现,鸡胚感染MG后肺组织中Let-7d的表达量显著下调。本试验以Let-7d为研究对象,探究其在MG感染过程中的作用及其分子机制。主要结果如下:1.MG感染细胞试验中,与正常组相比,DF-1细胞及CP-Ⅱ细胞在MG感染后,Let-7d的表达量显著降低（p<0.05）,与测序结果一致,而MKP1的m RNA和蛋白表达量均显著高于正常组（p<0.05）,与Let-7d的表达结果相反。超表达Let-7d后,能够显著上调MG感染的CP-Ⅱ细胞中p MGA1.2的m RNA及蛋白表达量。预测Let-7d可能调控MG的感染。2.利用miRDB、Target Scan软件及双荧光素酶报告基因系统检测显示,在CP-Ⅱ细胞中超表达Let-7d,转染野生型的MKP1 3’UTR质粒的双荧光素酶活性被显著抑制,而转染突变型质粒的双荧光素酶活性无显著变化。证明Let-7d能与MKP1的种子序列结合。CP-Ⅱ细胞中超表达Let-7d能极显著下调MKP1的蛋白表达量（p<0.01）;而抑制Let-7d的结果相反。表明MKP1是Let-7d的直接靶基因,且Let-7d负调控MKP1基因。3.抑制Let-7d能够显著下调MG感染的CP-Ⅱ细胞中P38、ERK、JNK的m RNA及磷酸化蛋白表达量（p<0.05）,而超表达Let-7d的结果相反。超表达MKP1能够显著抑制MAPK信号通路,抑制P38、ERK、JNK基因的m RNA表达量,而抑制MKP1的结果相反。表明下调的Let-7d通过上调MKP1来调控MG的感染。4.抑制Let-7d能够显著下调MG感染的CP-Ⅱ细胞中AP-1、免疫趋化因子RANTES和MIP-1β的m RNA表达量以及促炎因子TNF-α和IL-6的蛋白表达量（p<0.05）,而超表达Let-7d后的结果恰好相反。超表达MKP1能够显著抑制MG感染的CP-Ⅱ细胞中促炎因子IL-6和TNF-α的蛋白表达量（p<0.05）,而抑制MKP1的结果相反。说明感染细胞中下调的Let-7d通过抑制MAPK信号通路来抵御MG感染引起的炎症反应。5.MG感染引起CP-Ⅱ细胞的凋亡率显著升高,而细胞增殖率显著降低。抑制Let-7d显著促进MG感染后CP-Ⅱ细胞的增殖,抑制细胞凋亡,抑制Let-7d并干涉MKP1后,反而抑制CP-Ⅱ细胞的增殖,促进细胞凋亡;而超表达Let-7d的结果相反。证明MG感染后,低表达的Let-7d通过上调MKP1来促进增殖和抑制凋亡,从而抵御MG的感染。本研究结果揭示MG感染后显著下调的Let-7d通过上调靶基因MKP1抑制MAPK信号通路,有效缓解炎症反应,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡来抵御MG的感染。
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