百合是世界五大切花之一,花朵硕大,花色各异,花姿优雅,倍受人们的青睐。但是,百合随着花朵的开放而迅速衰老,如何延长花朵的寿命已成为近年来科学家们研究的主要课题之一。在百合切花衰老机理研究的基础上,通过构建百合ACC氧化酶基因的RNA干扰载体,将其转入百合中表达,将会明显达到延缓其衰老的目的。本研究旨在得到百合花器官中特异、高效表达的启动子,为载体构建提供有效的调控元件,使外源基因只在花中特异表达,达到时空特异表达的目的。本研究取得的主要结果如下:1.获得百合查尔酮合成酶基因(CHS)的cDNA片段以东方百合‘sobonne’为材料,提取花瓣组织RNA,根据Genbank已发表的查尔酮合成酶基因(CHS)的保守序列设计简并引物,通过RT-PCR获得了约900bp的目的片段,经克隆测序,该试验片段长873bp,与已发表的百合中CHS基因的同源性达到91%以上,说明克隆的片段属于查尔酮合成酶基因。该序列已在GenBank上登陆,登陆号为:DQ471950。2.获得了百合查尔酮合成酶基因(CHS)的DNA全长序列在获得CHS cDNA序列的基础上,重新设计CHS基因的引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得了大约1300bp的目的片段,经克隆测序后表明,该片段长1307bp,与已得到的cDNA序列对比分析,CHS基因DNA序列包含两个外显子和1个内含子。该序列已在GenBank上登陆,登陆号为:DQ471951。3.获得了百合查尔酮合成酶基因(CHS)上游调控区本研究比较应用了接头连接PCR和Uneven PCR两种染色体步移方法对CHS基因的上游序列进行克隆。结果表明,通过接头连接PCR,结合应用了巢式PCR,降落PCR,热启动PCR和两步PCR的特点,克隆了约898bp的百合CHS基因的上游调控序列。在启动子数据库Plant CARE中分析表明,该序列为一条未经报道的新序列,该序列具有花中专一性表达的基本保守区‘TACPyAT’,并且具备与转录起始有关的TATA盒,辅助转译的CAAT盒,G盒,CCAAT等基础启动子所具备的主要顺式作用元件。