论文部分内容阅读
研究目的：Bis(propyl)-cognitin(B3C)是多靶点抗阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)化合物，但其改善学习记忆的作用和具体机制尚不清楚。本课题研究B3C对β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)诱导的突触可塑性抑制及动物学习记忆损害的改善作用，探讨B3C对AD的治疗作用及神经保护机制，为将B3C研发为AD新药提供实验依据及理论基础。研究方法：1.电生理技术：以离体脑片为研究对象，选用wistar雄性大鼠，麻醉后断头取脑，制备新鲜脑片，在人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid，ACSF)中孵育1小时。电生理记录时，取新鲜脑片置于ACSF循环灌流的记录槽中，利用微操纵仪在海马齿状回区(dentate gyrus，DG)以细胞外电生理方法记录场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential， fEPSP)和长时程增强(long-termpotentiation，LTP)。利用pClamp10软件分析EPSP，并计算出LTP的幅度，实验数据均用均数±标准误(means±SEM)表示。计量资料用方差分析(ANOVA)和双尾t检验(two-tailed t test)进行分析。2.行为学方法：选用ICR雄性小鼠，利用立体定位仪在小鼠海马DG区注射Aβ1-42寡聚体建立AD模型，每天腹腔注射B3C进行干预，选用剂量为1.5，2.0，2.5μmol/kg B3C，B3C干预2周后，采用新物体识别实验和Morris水迷宫实验测试动物的学习记忆能力。在新物体实验中，首先记录动物在5分钟内对训练箱中左右对称位置放置的两个相同物体的探索时间，24小时后，将其中一个物体更换为新的物体，并观察5分钟内实验动物对新、旧物体分别探索的时间，从而计算出实验动物对新物体的识别指数。水迷宫实验分为训练期和探索期，在训练期主要记录逃避潜伏期作为统计指标，在探索期主要记录动物在靶象限探索的路程比及平台穿越次数，并进行统计分析。3.细胞学实验：选用新生第1天Wistar大鼠，取海马进行原代神经元培养。在体外培养第7天(day7in vitro，DIV7)，予500nM Aβ1-42寡聚体处理3小时或予B3C(0.1，0.5，1.0μM)预处理神经元2小时后加入500nM Aβ1-42寡聚体处理3小时，通过共聚焦显微镜观察神经元形态，并利用Image J软件分析树突丝的密度和长度。研究结果：1.高浓度B3C显著增强正常LTP的诱导和维持。2.B3C浓度依赖性改善甚至逆转Aβ1-42诱导的LTP抑制。3. B3C在新物体识别实验中增加Aβ1-42降低的动物新物体识别指数。4.B3C在水迷宫实验缩短Aβ1-42增加的训练期逃避潜伏期时间，增加探索实验期的靶象限探索路程比和平台穿越次数。5.B3C在大鼠海马神经元逆转Aβ1-42减少的树突丝密度。6. Aβ1-42或(和) B3C在大鼠海马神经元并不影响树突丝的长度。研究结论：B3C能够改善Aβ诱导的突触可塑性抑制及动物认知、空间学习记忆能力损害，提示B3C可能是AD潜在治疗药物。