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前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见恶性肿瘤之一,其发病率在我国呈逐年升高趋势。相关研究表明,前列腺癌的发生及其生物学特性与多种基因密切相关。KLK7 基因与KLK3(PSA)是组织激肽释放酶(KLK)基因家族的不同成员。KLK7 基因在被发现后,已在肿瘤研究中受到极大的关注。目的本实验旨在克隆前列腺癌细胞株KLK7 基因,以及初步探讨DHT(双氢睾酮)对前列腺癌PC-3 细胞株生长及KLK7 mRNA 表达的影响。方法(1)常规培养前列腺癌细胞株PC-3 细胞,提取前列腺癌细胞株总RNA,逆转录后进行PCR 扩增。将PCR 产物与质粒PGEM-Teasy 载体连接,重组DNA 转化感受态细胞后进行筛选,扩增,提取质粒进行酶切鉴定后双向测序分析。(2)常规培养前列腺癌细胞株PC-3 细胞,将PC-3 细胞分成7 组,分别给予不同浓度(空白对照、0.01%乙醇、10-9M、10-8M、10-7M、10-6M、10-5M)的DHT 刺激。用倒置相差显微镜观察细胞生长情况,在培养1、2、3、4 天分别测定细胞活性(MTT 法)。用RT-PCR 半定量测定各组KLK7 的mRNA表达量。结果(1)本实验在前列腺癌细胞株PC-3 细胞中成功克隆出KLK7 基因,与GenBank报告的人皮肤KLK7基因序列相比,有二个碱基不同,同源性99%。(2)在加用DHT后第一天10-8 M组细胞生长速度明显加快, MTT OD值与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。在第四天,分别加用10-9 M、10-8 M、10-7 M、10-6 M DHT,MTT OD 值与对照组比较均有显著性差异(P<0.05). 10-5M DHT 组与对照组OD 值比较无差异(P>0.05)。(3)RT-PCR 显示10-9 M、10-8 M、10-7 M、10-6 M DHT 组未见KLK7基因目的片段。空白对照组及10-5 M DHT 组可见KLK7基因目的片段的表达,与内参照基因光密度值比较分别为0.9061、0.9367。结论(1)实验证明在前列腺癌细胞株PC-3 细胞中有KLK7 基因的表达,