重组MTSase和MTHase双酶法转化淀粉生产海藻糖

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海藻糖是一种广泛存在于植物、藻类、细菌、真菌、酵母、昆虫等的非还原性二糖,具有稳定生物膜、蛋白质等等生物大分子及抗逆保鲜作用,展示了广阔的应用前景。 本论文从嗜热硫矿硫化叶菌(Sulfolobus solfataricus)ATCC 35092的基因组中用PCR方法扩增得到编码麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖海藻糖水解酶(MTHase)的基因,成功地构建了重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)(pTrc99a-MTSase)和E.coli BL21(DE3)(pTrc99a-MTHase),经过培养和诱导优化后,MTSase和MTHase酶活产率分别达到了31.3U·g(wet cell)-1和403.0 U·g(wet cell)-1。 考虑到S.solfataricus MTSase基因与大肠杆菌的密码子偏爱性上的差别,将MTSase基因5′和3′端的稀有密码子替换为大肠杆菌偏爱密码子,并优化mRNA翻译起始区域二级结构,同时以强翻译终止序列UAAU代替UAG,使MTSase表达水平提高到55.0 U·g(wet cell)-1。 重组菌诱导培养后,将破胞液经热处理后直接作为粗酶液作用于淀粉溶液,在75℃,pH5.0条件下,两酶联合作用转化淀粉生产海藻糖,当淀粉浓度为15%,DE值为10时,海藻糖转化率最高为53.6%。以直链淀粉为底物时,海藻糖的产率为78.7%。
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