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产志贺氏毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类重要的食源性病原菌,可引起水样腹泻、出血性肠炎(Hemorrhagic colitis,HC)、溶血性尿毒综合征(Hemolytic uremic syndrome,HUS)等病死率高的疾病。牛等反刍动物是STEC的主要储存宿主。作为世界牛肉大国的中国未见有关于肉牛屠宰过程中产志贺氏毒素大肠杆菌污染特点的研究报道,这不但增大了国民食用牛肉的安全风险,也制约了我国肉牛企业健康、快速的发展。本课题的目的在于研究肉牛屠宰过程中产志贺氏毒素大肠杆菌的流行分布情况,评估屠宰加工过程中可能存在的易感环节;通过对调查环节分离出的STEC菌株进行分离纯化检测,确定牛源STEC的血清型、主要毒力基因及耐药性。本研究主要结果如下:本实验对样品的预处理、PCR初筛条件进行了优化,确定离心除杂条件为:5000rcf,6min;确定最终PCR反应条件为:预变性94℃2min,变性94℃30S,退火56℃30s,延伸72℃1min,35个循环,终延伸72℃10min。采用STEC显色培养基对PCR初筛后的阳性样品进行二次筛选。通过对2个肉牛屠宰厂6个取样点(粪便、去皮前、去皮后、喷淋后、排酸后、分割后)600个样品的检测,从26(4.33%)份样品中分离到产志贺氏毒素大肠杆菌。对于STEC,6个取样点的阳性检出率分别为18.0%,4.0%,1.0%,2.0%,1.0%,和0.0%。从600份样品中分离出26株STEC,以STX为目的基因进行双重PCR,其中仅含stx1基因的9株,占总分离菌株的34.62%;仅含stx2基因的6株,占23.08%;含stx1和stx2的11株,占42.31%。采用大肠杆菌O抗原诊断血清对分离纯化的菌株进行玻片凝集实验:26株产志贺氏毒素大肠杆菌中确定了16种血清型,共24株,占92.31%,其中血清型为O39的菌株6株,O76的菌株4株,为优势血清型,共占所鉴定出菌株的38.46%,还有2株血清型未确定。采用Kirby-Bauer法分析产志贺氏毒素大肠杆菌分离菌株对抗生素的敏感特性,26株STEC菌株对四环素、氨苄西林、头孢咗啉、头孢呋辛、氨苄西林舒巴坦、复方新诺明抗生素具有较高的耐药性,耐药性分别为30.77%、26.92%、23.08%、23.08%、19.23%和19.23%,且26.92%的菌株表现为多重耐药性;对磷霉素的敏感性最高,敏感率为96.15%,对环丙沙星、呋喃妥因、复方新诺明比较敏感,敏感率分别为80.77%、76.92%、73.08%。