Mniochloa abersend生物学特性观察及再生体系建立

来源 :浙江农林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ie8848
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目前关于竹子的再生及遗传转化体系的建立都集中在木本竹类中,但木本竹类生长周期长,开花结实困难,再生体系效率较低的特性限制了其遗传转化体系的建立及竹子基因功能验证。本研究首先对引种的草本竹进行了生物学特性观察,在了解其特性后,采用芽为外植体,探索了不同基本培养基以及不同的植物激素组合对其愈伤组织诱导、增殖、分化以及试管苗生根的影响,成功建立了M.abersend的高效再生体系。根据其再生体系,对其遗传转化条件进行了探索,并初步建立了遗传转化体系,为竹子基因功能验证开辟了新的途径。主要的研究结果如下:1.M.abersend生物学特性M.abersend为多年生丛生草本竹,不适宜在0℃以下环境生长;具有每年开花结实的特性;花序属于穗形总状花序,为真花序;基本单位是孪生小穗。2.M.abersend再生体系的建立(1)最适宜愈伤组织诱导的培养基为:MS+1mg·L-1 2,4-D+1 mg·L-1 NAA+30g·L-1 sucrose+0.8%type A agar,愈伤组织和致密愈伤组织诱导率分别为82.22%和73.07%,且愈伤组织生长良好,具有较好的增殖能力。(2)最适宜愈伤组织增殖的培养基为:MS+0.1mg·L-1 2,4-D+30 g·L-1 sucrose+0.8%type A agar,此时愈伤组织增殖倍数可达8.01,且产生大量胚状体。(3)M.abersend的愈伤组织分化率可达100%。最适宜愈伤组织分化的培养基为:MS+1 mg·L-1 KT+1 mg·L-1 NAA+30 g·L-1 sucrose+3 g·L-1 gelrite,此时芽的叶片鲜绿,生长健壮。(4)M.abersend的生根率可达100%。最适宜试管苗生根的培养基为:1/2 MS+0.5 mg·L-1 IBA+30 g·L-1 sucrose+3 g·L-1 gelrite,此时试管苗接种3天后便会生根,根长且粗壮易于移栽。(5)再生试管苗经驯化移栽入等配比的泥炭、珍珠岩、蛭石的混合基质中,移栽成活率达90%且植株生长健壮。3.M.abersend遗传转化研究(1)适宜愈伤组织转化的条件:选取致密良好愈伤组织采用液体培养基进行预培养三天,选用的农杆菌菌株为LBA4404,在其OD600值为0.5时侵染20min,再经过3d共培养后进行筛选。一个月以后统计抗性愈伤组织率可达到34.67%,且愈伤组织生长良好。(2)将经过筛选的抗性愈伤组织一部分进行分化再生,一部分进行PCR检测,其抗性愈伤组织的转化率为26.67%,cod A基因已经转入到愈伤组织中。待其愈伤组织分化成苗后将继续进行检测。
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